新生大鼠原代心肌細(xì)胞分離試劑盒

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡介

大鼠原代心肌細(xì)胞分離試劑盒是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell^?）開發(fā)的一款用于新生大鼠心臟原代心肌細(xì)胞分離和培養(yǎng)的高效試劑盒。在細(xì)胞分離中，充分優(yōu)化分離過程以及培養(yǎng)試劑，可獲得高純度、高活性的原代心肌細(xì)胞。

產(chǎn)品特性

l 高效分離原代心肌細(xì)胞，產(chǎn)量提高1.5-4倍。

l 可分離得到高純度、高活性心肌細(xì)胞。

產(chǎn)品內(nèi)容

相關(guān)產(chǎn)品

大鼠心肌細(xì)胞維持培養(yǎng)基（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001036） 

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

A. 使用75%酒精擦拭試驗(yàn)臺(tái)；

B. 準(zhǔn)備酒精燈、酒精棉及用于盛放實(shí)驗(yàn)處理后大鼠的垃圾袋；

C. 剪刀、鑷子、微型鑷子等解剖用具需提前進(jìn)行滅菌處理；

D. 吸取適量Wash Buffer至培養(yǎng)皿中并放置于冰上（細(xì)胞房內(nèi)操作）。

注意：細(xì)胞房和超凈工作臺(tái)需提前進(jìn)行紫外滅菌處理；培養(yǎng)皿大小的選擇取決于實(shí)

驗(yàn)時(shí)所取心臟的數(shù)目，Wash Buffer一直放于冰上保持低溫。

E. Rat Cell Dissociation Solution在4℃融化，分裝，放-20℃長期保存，不要反復(fù)凍存。

F. 培養(yǎng)板用Ready-to-use GelⅠ提前60min包被。（6孔板：1ml/孔；10cm dish:7ml/孔）

操作方法

1. 取心臟

A. 左手捏住大鼠背部皮膚，使用酒精棉（75%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠劍突處正中線偏左向上剪開，略壓胸骨，使心臟自然跳出，用彎鑷子勾住心臟根部，取出心臟，置于盛有預(yù)冷Wash buffer的培養(yǎng)皿中。

B. 在解剖鏡下使用微型鑷子和解剖剪剪去心房。

2. 組織清洗：經(jīng)酒精擦拭后，將培養(yǎng)皿移入細(xì)胞房超凈工作臺(tái)，用預(yù)冷的Wash buffer清洗3次，去除血污后，將心臟剪成約1mm³的組織塊，再清洗2次。

3. 預(yù)消化

加入1-3ml Rat Cell Dissociation Solution ，37℃水浴中搖動(dòng)，消化1min后棄上清。

4. 消化

A.在50ml離心管中加入5ml Rat Cell Dissociation Solution，37℃水浴中搖動(dòng)消化7min后將上清液加入預(yù)冷的5ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium中，混合均勻并置于冰上，保持低溫。

注意：每次Rat Cell Dissociation Solution使用的量可根據(jù)組織塊的多少進(jìn)行調(diào)整。

B. 重復(fù)4.A的步驟直至組織完全消化。

注意：吸取上清時(shí)盡量避免吸出沉淀。

C.將收集的上清在室溫下1260rpm，離心5min，輕輕吸除上清，用Rat Cardiomyocytes Culture Medium重懸細(xì)胞。

5. 差速貼壁：

細(xì)胞通過70um/100μm濾網(wǎng)過濾，并通過以下方式進(jìn)行差速貼壁，

A、直接接種到培養(yǎng)板中；

B、接種到使用Ready-to-use GelⅠ包被培養(yǎng)板上；

A、B選擇一種方法進(jìn)行差速貼壁即可，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO₂）中孵育60min-90min，進(jìn)行差速貼壁；

此時(shí)，使用Ready-to-use GelⅡ 包被培養(yǎng)板，以備后續(xù)細(xì)胞鋪板使用。

注意：孵育時(shí)間根據(jù)不同品牌培養(yǎng)板貼壁能力不同，貼壁時(shí)間可以做出適當(dāng)調(diào)整。因?yàn)椴煌放婆囵B(yǎng)板貼壁能力不同，B選項(xiàng)進(jìn)行包被，可以提高細(xì)胞貼壁比例。

6. 細(xì)胞鋪板：

取出差速貼壁培養(yǎng)皿，將上清細(xì)胞懸液移入15ml離心管中，1260rpm，離心5min，輕輕吸除上清，用已經(jīng)預(yù)先加熱至37℃的1-2ml Rat Cardiomyocytes Culture Medium重懸細(xì)胞。利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，用臺(tái)盼藍(lán)檢測細(xì)胞存活率。根據(jù)所計(jì)的細(xì)胞數(shù)使用Rat Cardiomyocytes Culture Medium進(jìn)行稀釋調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞移至預(yù)先使用Ready-to-use GelⅡ包被好的培養(yǎng)皿/板中。

7. 觀察

將培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察細(xì)胞狀態(tài)，若細(xì)胞狀態(tài)佳且濃度合適，則可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞形態(tài)圖

                               大鼠心肌細(xì)胞熒光染色圖 200×