新生小鼠心肌細(xì)胞分離試劑盒

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

新生小鼠心肌細(xì)胞分離試劑盒是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell^?）開發(fā)的一款用于新生小鼠心臟原代心肌細(xì)胞分離和培養(yǎng)的產(chǎn)品。本產(chǎn)品提供一種簡(jiǎn)單高效的小鼠原代心肌細(xì)胞分離方法，該方法為基于心肌細(xì)胞的體外藥物篩選以及藥物評(píng)估提供了非常好的原料。在細(xì)胞分離中，充分優(yōu)化分離過(guò)程，以及培養(yǎng)試劑，獲得高純度、高活性的原代心肌細(xì)胞。使用本試劑盒進(jìn)行細(xì)胞分離、培養(yǎng)的原代心肌細(xì)胞，可表達(dá)心肌細(xì)胞蛋白標(biāo)記物和保持細(xì)胞收縮性。

產(chǎn)品特性

l 采用二級(jí)消化法，特異性除去非心肌細(xì)胞，獲得高純度心肌細(xì)胞。

l 細(xì)胞貼壁效果更好、活性更高。

l 分離心肌細(xì)胞產(chǎn)量更高，損失更少。

產(chǎn)品內(nèi)容

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

A. 使用75%酒精擦拭試驗(yàn)臺(tái)；

B. 準(zhǔn)備酒精燈、酒精棉及用于盛放實(shí)驗(yàn)處理后小鼠的垃圾袋；

C. 剪刀、鑷子、微型鑷子等解剖用具需提前進(jìn)行滅菌處理；

D. 吸取適量Wash Buffer至培養(yǎng)皿中并放置于冰上（細(xì)胞房?jī)?nèi)操作）。

注意：細(xì)胞房和超凈工作臺(tái)需提前進(jìn)行紫外滅菌處理；培養(yǎng)皿大小的選擇取決于實(shí)驗(yàn)時(shí)所取心臟的數(shù)目，Wash buffer一直放于冰上保持低溫。

操作方法

1. 取心臟：

A. 左手捏住小鼠背部皮膚，使用酒精棉（95%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠劍突處正中線偏左向上剪開，略壓胸骨，使心臟自然跳出，用彎鑷子勾住心臟根部，取出心臟，置于盛有遇冷Wash buffer的培養(yǎng)皿中。

B. 在解剖鏡下使用微型鑷子和解剖剪剪去心房。

2. 組織清洗和預(yù)消化：

A. 經(jīng)酒精擦拭后，將培養(yǎng)皿移入細(xì)胞房超凈工作臺(tái)，用遇冷的Wash buffer清洗3次，去除血污后，將心臟剪成約1mm³的組織塊，再清洗2次，

3. 將組織塊移入培養(yǎng)瓶中，加入適量Mouse Cell Dissociation SolutionⅠ后放入4℃冰箱消化過(guò)夜。

注意：預(yù)消化時(shí)間可根據(jù)心臟數(shù)目進(jìn)行調(diào)整，最多不超過(guò)24h。

第二天：

1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

水浴鍋溫度調(diào)至37℃，將Wash Buffer放入水浴中加熱。把心臟從4℃冰箱取出并將其中的心臟和消化液移入一個(gè)新的50ml離心管中，加入等量經(jīng)預(yù)熱的Wash Buffer, 37℃水浴鍋中搖動(dòng)消化1min后棄上清；

2. 消化：

A. 在50ml離心管中加入5ml Mouse Cell Dissociation SolutionⅡ，37℃水浴中搖動(dòng)消化7min后將上清液加入遇冷的10ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium中，混合均勻并置于冰上保持低溫。

注意：每次消化液使用的量可根據(jù)組織塊的多少進(jìn)行調(diào)整。

B. 重復(fù)2.A的步驟直至組織完全消化。

注意：吸取上清時(shí)盡量避免吸出沉淀。

C.將收集的上清在常溫下1260rpm，離心5min。輕輕吸除上清，用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重懸細(xì)胞。

3. 差速貼壁：

A. 將重懸的細(xì)胞經(jīng)過(guò)100μm濾網(wǎng)過(guò)濾，直接接種到培養(yǎng)皿中，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO₂）中孵育60-75min。

B. 取上清移至新的培養(yǎng)皿中，重新放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育60-75min。

注意：孵育時(shí)間根據(jù)培養(yǎng)皿貼壁能力可做適當(dāng)調(diào)整；

4．細(xì)胞鋪板：

A. 將Mouse Cardiomyocytes Culture Medium預(yù)先在37℃水浴中加熱。

B. 取出培養(yǎng)皿，將上清移入15ml離心管中，530rpm，離心5min，輕輕吸除上清，用已經(jīng)預(yù)先加熱至37℃的2ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重懸細(xì)胞。

C. 利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，用臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞存活率。

D. 根據(jù)所計(jì)的細(xì)胞數(shù)量使用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium進(jìn)行稀釋調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞移至包被好的孔板或培養(yǎng)皿中。

E. 將培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察細(xì)胞狀態(tài)，若細(xì)胞狀態(tài)佳且濃度合適，則可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞形態(tài)圖