人間充質(zhì)干細胞成骨分化試劑盒

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡介

人間充質(zhì)干細胞成骨分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell^TM）自主研發(fā)的一款用于人間充質(zhì)干細胞誘導成骨分化的產(chǎn)品，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質(zhì)干細胞的誘導成骨分化。

產(chǎn)品特性

l 誘導分化程序簡單便捷。

l 誘導成骨細胞效率高。

產(chǎn)品內(nèi)容

1. 相關(guān)材料

? Xeno-Free人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基（Applied Cell^?:AC-1001003）

? 人間充質(zhì)干細胞成骨分化試劑盒（Applied Cell^?:AC-1001027）

? 成骨檢測染液（Applied Cell^?:AC-1001021）

? Xeno-Free細胞消化液（Applied Cell^?:AC-1001024/1001025）

? 磷酸鹽緩沖液(1×PBS) （Applied Cell^?: Cat.AC-1001037） 

2. 實驗準備

人間充質(zhì)干細胞成骨分化培養(yǎng)基配制：

2.1 2-8℃解凍人間充質(zhì)干細胞成骨分化添加劑，輕晃搖勻；

2.2 隨后將添加劑依次加入到人間充質(zhì)干細胞成骨分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（添加劑10mL與90mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹底混合）混勻，即為人間充質(zhì)干細胞成骨分化培養(yǎng)基。人間充質(zhì)干細胞成骨分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲存2-3周。

注意：人間充質(zhì)干細胞成骨分化添加劑只能在2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請用培養(yǎng)基潤洗添加劑試管1-2次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。

3.實驗操作

3.1誘導成骨（以6孔板為例）

3.1.1 使用細胞細胞包被液包被細胞培養(yǎng)板，將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細胞接種到6孔板上，密度為2×10⁵ -3×10⁵ cells/cm²或2×10⁵ -3×10⁵ cells/孔，置于37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當細胞匯合度達到80%-90%時，小心的將孔內(nèi)人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基吸掉，向6孔板中加入2 mL人間充質(zhì)干細胞成骨分化培養(yǎng)基,以此記為第0天；

注意：成骨分化容易使細胞卷起，，成骨分化時應(yīng)使用包被液包被細胞培養(yǎng)板。

3.1.2 每隔1-2天更換新鮮的人間充質(zhì)干細胞成骨分化培養(yǎng)基；

注意：為防止成骨細胞脫落，建議成骨過程中出現(xiàn)大量鈣結(jié)節(jié)之后，換液形式變?yōu)槊?/span>天一次半量換液。

3.1.3 誘導14-21天期間，視細胞的形態(tài)變化及生長情況（如圖1所示），可用成骨檢測染液（Applied Cell:AC-1001021）進行染色。

人間充質(zhì)干細胞在誘導成骨分化2天(A)、6天（B）、14天(C)的細胞照片，可以觀察到成片的鈣結(jié)節(jié)（100×）

3.2 成骨檢測染液染色

3.2.1 誘導成骨分化結(jié)束后，吸掉6孔板中的成骨分化培養(yǎng)基，用PBS沖洗1-2次。每孔加入1 mL細胞固定液，固定10~30 min；

3.2.2 吸掉細胞固定液，PBS沖洗2次。每孔加入2 mL成骨檢測染液，染色3-5 min；

3.2.3 吸掉成骨檢測染液，用PBS沖洗2-3次；

3.2.4 將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察成骨染色效果（如圖2所示）。

人間充質(zhì)干細胞在誘導成骨后成骨檢測染液染色前（D）和染色后(E)的照片（200×）