人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell^?）研發(fā)的一款適用于人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基可用于EB（擬胚體）的形成。擬胚體是人多能干細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)條件下形成的球狀結(jié)構(gòu)，可用于細(xì)胞多能性檢測(cè)，形成擬胚體可驗(yàn)證細(xì)胞分化潛能。

產(chǎn)品特性

l 誘導(dǎo)人多能干細(xì)胞（ES/iPS）形成擬胚體

產(chǎn)品內(nèi)容

相關(guān)產(chǎn)品

人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001000）

Advance人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001001）

人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001002）

人多能干細(xì)胞無(wú)酶消化液（Applied Cell^T?: Cat. no.AC-1001008）

即用型基質(zhì)膠（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001007）

人iPS細(xì)胞（Applied Cell^?: Cat. no.AC-2001001）

人ES細(xì)胞（Applied Cell^?: Cat. no.AC-2001002）

操作方法

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基配制：

1.1 在2-8℃解凍人多能干細(xì)胞分化添加劑，輕晃搖勻；

1.2 隨后將添加劑加入到人類多能干細(xì)胞分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（每10mL添加劑與500mL分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹底混合）混勻即為人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基（AC-1001002）。人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存2-3周。

注意：

1. 人多能干細(xì)胞分化添加劑只能在2-8℃解凍，可按實(shí)際用量對(duì)添加劑進(jìn)行分裝，分裝后立即使用或儲(chǔ)存于-20℃至-80℃保存。

2. 人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基使用前建議在室溫平衡10-20min，不建議在37℃加熱。

實(shí)驗(yàn)操作(以6孔板為例)

2.1 在顯微鏡下觀察人多能干細(xì)胞，確認(rèn)細(xì)胞匯合度達(dá)到70–80%，準(zhǔn)備傳代。

2.2 清洗：拿出培養(yǎng)板,吸掉原有培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿邊緣緩慢加入37℃預(yù)熱PBS緩沖液，輕輕晃動(dòng)沖洗，然后吸去PBS緩沖液；

2.3 消化：在培養(yǎng)板中加入1.5mL人多能干細(xì)胞無(wú)酶消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿

底，并置于37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中孵育2~5 min；

2.4  吹打：吸掉人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）后，立刻加入室溫平衡好的人

多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基，用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底，吹打次數(shù)保持在

3~5次，使皿底貼附的干細(xì)胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻，制成干細(xì)胞懸液；

注意：吹吸皿底細(xì)胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在3~5次為宜，盡量避免形成單細(xì)胞。如有少量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落，屬于正常現(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落，需延長(zhǎng)消化時(shí)間。

3.5制備擬胚體

3.5.1懸滴培養(yǎng)法制備擬胚體

A. 稀釋：將細(xì)胞懸液稀釋，細(xì)胞密度約為1-2×10⁵cells/mL；

B. 制備懸滴：將稀釋好的細(xì)胞懸液以30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均勻接種在培養(yǎng)皿皿蓋內(nèi)面，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿蓋將其扣回加有PBS的培養(yǎng)皿上（加入PBS防止懸滴蒸發(fā)），放入37℃，5%CO₂箱中培養(yǎng)；

C. 3-4天后，非貼壁型培養(yǎng)皿中預(yù)先加入人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿蓋上的懸滴轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中（6cm培養(yǎng)皿加入3-4mL培養(yǎng)基)中，可觀察到明顯的擬胚體結(jié)構(gòu)，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿使擬胚體均勻分布在培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。

3.5.2懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體  

A. 稀釋：將細(xì)胞懸液稀釋，細(xì)胞密度約為2-5×10⁵cells/mL；

B. 接種：將稀釋好的細(xì)胞懸液接種至非貼壁型培養(yǎng)皿內(nèi)。

3.6換液

A. 換液頻率：使用懸滴法制備擬胚體,將懸滴接入非貼壁型培養(yǎng)皿繼續(xù)培養(yǎng)后，每2-3天換一次液；使用懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體，大約在第3天形成明顯的擬胚體結(jié)構(gòu)，可進(jìn)行初次換液，后續(xù)每2-3天換一次液;

B. 換液方法：將需換液的擬胚體懸液轉(zhuǎn)移至15mL/50mL離心管中，靜置約3min,待擬胚體沉降至管底，吸掉上清，加入室溫平衡好的人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基，用巴士滴管輕輕轉(zhuǎn)移至非貼壁型培養(yǎng)皿中，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿使之均勻分布在培養(yǎng)皿中，37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

擬胚體形態(tài)圖

                擬胚體形態(tài)圖 

質(zhì)量控制