Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基是埃澤思生物（Applied Cell^?）自主研發(fā)的一款無外源動(dòng)物成分的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基?？蓱?yīng)用于人骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)，并保持其多向分化潛能。本產(chǎn)品內(nèi)毒素水平遠(yuǎn)低于中國藥典標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)過程遵循ISO9001體系,并符合GMP指導(dǎo)原則。

Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基主要成分：氨基酸，維生素、無機(jī)鹽、白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素，細(xì)胞因子等。

產(chǎn)品特性

l 無外源動(dòng)物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險(xiǎn)。

l 全程無血清生產(chǎn)，極大降低批次間差異。

l 可用于原代分離，且培養(yǎng)過程無需包被培養(yǎng)板。

l 擴(kuò)增效率高，24h左右增殖翻倍，節(jié)省培養(yǎng)時(shí)間。

l 內(nèi)毒素<0.06EU/ml，遠(yuǎn)低于中國藥典水平

產(chǎn)品內(nèi)容

相關(guān)產(chǎn)品

Serum-Free細(xì)胞凍存液（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001006）

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell^?: Cat. no.AC-2001003）

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell^?: Cat. no.AC-2001004）

Xeno-Free細(xì)胞消化液（Applied Cell^?: Cat. no. AC-1001024/1001025 ）

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基配制

1.1 37℃快速解凍人間充質(zhì)干細(xì)胞添加劑，快速溶解時(shí)不易破壞添加劑中營養(yǎng)物質(zhì)，時(shí)間大致為10min。待添加劑融化后搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲(chǔ)存于-20℃至-80℃，避免反復(fù)凍融 。

1.2將添加劑以10%比例加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻，即為人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）。混合后培養(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲(chǔ)存2-3周，不建議使用已配制超過3周的培養(yǎng)基。

1.3人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基可直接應(yīng)用于人類骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)。

操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)

hMSC細(xì)胞復(fù)蘇(10cm dish)

2.1  從液氮中取出凍存的hMSC細(xì)胞，迅速將凍存管放入37℃水浴快速融解。

2.2 在生物安全柜或超凈臺(tái)中，將解凍后的細(xì)胞懸液緩慢加入5 mL預(yù)溫的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001003）。

2.3 1000rpm 離心3 min，吸掉上清，加入10ml人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

2.4 將細(xì)胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動(dòng)培養(yǎng)皿使細(xì)胞均勻分布，5% CO₂的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)。

2.5 24h后更換新鮮人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每2-3天更換培養(yǎng)液。

hMSC細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%，即可傳代。

2. 在超凈臺(tái)/安全柜中，吸掉原有培養(yǎng)基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free細(xì)胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底。

3. 室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-4分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。

4. 加入消化液2倍體積的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散。

5. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min。

6. 棄上清，加入人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)。1：3-1：4比例傳代，或按1-2x10⁴ cells/cm² 傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意：細(xì)胞傳代所需的時(shí)間：2-4天。5代及之前的細(xì)胞，生長速度較快。5代以后的細(xì)胞，生長速度稍緩。

hMSC細(xì)胞凍存

1.  細(xì)胞達(dá)到90%匯合度， 吸掉原有培養(yǎng)基，PBS清洗一次。

2. 加入Xeno-Free細(xì)胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育4-5min或37℃孵育2-4min分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。

3. 加入消化液2倍體積的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散。

4.   將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min，吸掉上清。

5. 加入適量Serum-Free細(xì)胞凍存液（AC-1001006），調(diào)整細(xì)胞凍存密度在1×10⁶ cells/mL左右，每支凍存管分裝1.5-2ml。

6. 直接放入-80℃，24h后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。

細(xì)胞形態(tài)圖

間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)圖

                 脂肪生成                              成骨生成                                   軟骨生成