淺談液相色譜儀應用方案的建立方法
液相色譜儀檢測的靈敏性較高,被廣泛運用于食品、醫(yī)藥等領域,其主要檢測項目是食品和藥物工業(yè)生產過程中的藥品殘留,減少對人體的傷害。相關檢測、科研部門在建立藥品中特定物質檢測或含量測定的應用方案時,須按照藥典收載的相關藥品分析方法的質量標準進行。建立完整的液相色譜儀檢測方案需涵蓋檢測儀器、檢測試劑、樣品的制備、液相色譜儀檢測條件、檢測結果以及結果分析方法。
在建立方法時,選擇儀器配置以及試劑應當注意以下事項:①液相色譜柱填料首選十八烷基鍵合硅膠;②檢測器首選UV檢測器;流動相首選甲醇-水系統(tǒng),應盡可能少用含有緩沖液的流動相,如為堿性藥物,流動相的pH值應為7~8;如為酸性藥物,流動相的pH值應為3~4;④內標物應首選易得到的純度較高的化學試劑或對照品,應與待測物質化學結構相似,理化性質接近,峰的響應值相當,以及分離度應大于1.5。
待檢測樣品溶液的配置可直接由樣品原料經攪碎、溶解、過濾、提取而來,提取出來的樣品溶劑必須經過氮吹儀結晶提純處理后,再經溶劑過濾器過濾方可進入儀器進行檢測分析。
檢測過程中,須按照色譜檢測條件操作,且要精準控制液相色譜儀各部件的試驗狀況,包括進樣器、泵的壓力調整,流動相的流速控制,色譜柱溫箱、檢測器、進樣口的溫度控制等都須嚴格執(zhí)行。任何檢測條件的異動都會影響到檢測結果的準確性。
檢測結果的分析,即對檢測樣品的定性定量分析,需注意以下事項:若雜質峰的響應值與主成分峰的響應值相差太大,應首選自身對照法,而不宜選用面積歸一化法;若以內標法測定含量,應考慮內標物是否含有干擾供試品的雜質;如以外標法測定含量,對照品與供試品應各取樣2份,對照溶液各進樣3次,供試品溶液各進樣2次,計算相對標準差(RSD應不得大于l.5%)。
最后,應進行最低檢出量試驗,并對同一樣品分析結果的重現(xiàn)程度、方法的可行性,并作出評價。