色譜柱在色譜儀分析檢測過程中起著分離樣品組分的作用，其分離度直接影響色譜儀檢測的靈敏度和速率。影響色譜柱分離度的因素包括固定相和流動相的選擇、流速和溫度的控制、理論塔板高度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性。其中，組分在色譜柱上的分離效果,主要取決于用在填充色譜柱的固定相。
    固定相填充質(zhì)量的好壞直接影響填充柱的柱效，因此，色譜柱固定相的填充方法也是很重要的。一根填充質(zhì)量較高的色譜柱，通常其理論塔板數(shù)應(yīng)該達(dá)到2000-3000/m，根據(jù)填充物粒度的大小，可分為濕法裝柱和干法裝柱。
    濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗?quot;走柱子"，本法最大的優(yōu)點是一般柱子裝的比較結(jié)實，沒有氣泡。
    干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)，至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結(jié)實。接著是用淋洗劑"走柱子"，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。
    濕法裝柱和干法裝柱這二者各有優(yōu)劣，不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導(dǎo)致分離效果不好。為了獲得最佳的填充密度，可選擇適當(dāng)?shù)募訅骸p壓或是手工填充的方法進(jìn)行填充色譜柱。

（1）加壓法
    加壓法是將填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉，另一端與填料池連接。先將固定相倒入填料池，填料池的另一端出口與氮氣或空氣鋼瓶的減壓閥連結(jié)。對于常見內(nèi)徑為4.5mm的填充柱，可調(diào)節(jié)氣流為30ml/min（氣流應(yīng)隨內(nèi)徑大小作相應(yīng)調(diào)整），將填充池內(nèi)的固定相壓入填充柱中，同時用木棒輕敲填充柱體使固定相填充均勻。裝柱要求要填充得均勻，緊密，切忌有空隙。固定相填充完畢后，在原來連接填充池的一端塞上硅烷化的玻璃棉，注意這一端應(yīng)該與色譜儀的進(jìn)樣室相連接，另一端作為出口端與檢測器相連接，不能接反。
    加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會減低分離效果。

（2）減壓法
    減壓法一般用于填充長柱子。這個方法采用真空泵抽氣，將填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉后與真空泵的緩沖安全瓶相連接。為了防止抽氣時潮濕空氣進(jìn)入而使固定相性能受影響，可以在填料池加入固定相后，在入氣口接氯化鈣和硅膠干燥塔，其他操作過程與加壓填充法相同。
    減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚至更多，但是由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)（有時在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時間長）。

（3）手工填充法
    手工填充法一般只用于某些涂有沸點較低固定液的固定相的填充。通常采用邊裝邊敲打的辦法。每次加進(jìn)柱內(nèi)的填料約5cm。填充時應(yīng)注意兩點：一是固定相要填充均勻和緊密適度，柱內(nèi)不留有死空間或者間隙；二是要避免填充過程中敲打振動過猛，造成固定相機械粉碎。
    壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chǎn)品收集的時間，但是會減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時候，常壓柱是效率最高的，但是時間也最長。