打開離心機(jī)，冷卻至4℃。并將所用試劑、緩沖液、實(shí)驗(yàn)、解剖工具、組織勻漿工具以及離心機(jī)轉(zhuǎn)子等預(yù)冷至4℃（或放在冰上預(yù)冷）。

1.1麻醉

麻醉大鼠（麻醉藥物注射/氣體麻醉均可）

1.2分離步驟

a)處死大鼠，從顱骨中解剖大腦（可選擇需要的腦區(qū)），將解剖后部分轉(zhuǎn)移至4℃分離緩沖液A（緩沖液配方見文末）中，洗去雜質(zhì)。

b)將組織從緩沖液取出，吸干多余水分，稱量，測定濕重。稱后，仍轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)移至4℃分離緩沖液A中短時間保存

c)準(zhǔn)備組織勻漿化：將組織取出，用分離緩沖液A潤濕，用尖頭剪刀（如眼科剪）將組織剪碎，剪至糊狀小塊。

d)使用4℃分離緩沖液A重懸組織糊狀小塊，然后轉(zhuǎn)移到預(yù)冷玻璃容器或離心管（該步驟可選擇將組織移入特定勻漿機(jī)套管中，重懸液體積可根據(jù)容器情況調(diào)整）中。

e)在1000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下或手動玻璃研磨，研磨8-10次，得到均勻無塊狀組織液。

f)轉(zhuǎn)移到50ml 離心管中，調(diào)整體積，得到約5%成分的勻漿液 (即每20 - 30ml勻漿液含有1g組織)。

g)4°C、1000 g離心10分鐘，留下上清液。

h)將上清液轉(zhuǎn)移到新管中， 4°C、6200 g離心10分鐘，棄上清液。

i)使用分離緩沖液B重懸線粒體(沉淀)， 4°C、6200 g離心10分鐘，棄上清液。

j)將沉淀物（即線粒體）重新懸浮在少量分離緩沖液B中（約1g組織中的線粒體懸浮液體積約1ml）。

k)將提取好的純化線粒體用于實(shí)驗(yàn)。

02

試劑

2.1分離緩沖液A

用Tris, HCl調(diào)節(jié)pH值至7.4

2.2 分離緩沖液B

不含BSA的分離緩沖液A。

03

參考文獻(xiàn)

Sumbalová Z, Kucharská J, Kristek F (2010) Losartan improved respiratory function and coenzyme Q content in brain mitochondria of young spontaneously hypertensive rats. Cell Mol Neurobiol 30:751-8.

1、獨(dú)有的光電聯(lián)合多參數(shù)實(shí)時動態(tài)檢測技術(shù)：

電化學(xué)實(shí)時動態(tài)檢測模塊：pO₂（高分辨率極譜氧電極傳感器，耗氧率檢測分辨率為±1 pmol O??s-1?mL-1）、pH、H₂O₂、TPP⁺（測量線粒體膜電位）、H₂S、NO、質(zhì)體醌；

熒光實(shí)時動態(tài)檢測模塊：MMP（測量線粒體膜電位）、ATP、Ca²⁺、ROS、NADH；

2、獨(dú)有的原代細(xì)胞、原代組織能量代謝快速檢測技術(shù)：

無需過夜培養(yǎng)、樣品快速檢測，更加客觀反映樣品更接近體內(nèi)的能量代謝水平；

3、獨(dú)有的多維度能量代謝分析平臺：

適應(yīng)線粒體、細(xì)胞、組織塊、活檢樣品等不同層次不同水平的樣本檢測。

北京華威中儀科技有限公司成立于2006年，歷經(jīng)多年的積累與沉淀，華威公司已經(jīng)成為國內(nèi)領(lǐng)先實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的供應(yīng)商/技術(shù)服務(wù)商。

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