FITC熒光二抗？——EarthOx新型DyLight 488綠色熒光

FITC（Fluorescein Isothiocyanate，異硫氰酸熒光素）是一種綠色熒光團(tuán)，在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)里，經(jīng)常被用于熒光團(tuán)標(biāo)記到相應(yīng)的檢測(cè)分子，如抗體上。FITC的純品為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。FITC分子量為389.4，最大吸收光波長(zhǎng)為 490～495nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應(yīng)用最廣泛的熒光素。由于FITC是小分子化合物，每一個(gè)抗體可標(biāo)記幾個(gè)FITC分子，IgM通常用小分子的熒光素標(biāo)記，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。

我們知道，F(xiàn)ITC的綠色熒光強(qiáng)度肉眼觀察已經(jīng)很亮了，但是從上面的圖可見(jiàn)，與Cy2相比還是偏弱，而DyLight 488則更勝一籌。DyLight是一種新型的熒光分子，與傳統(tǒng)的熒光團(tuán)如FITC、Rhodamine、Texas Red等相比，具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度、更高的光學(xué)穩(wěn)定性以及特異性等。同時(shí)，DyLight種類齊全，如Dylight 405就是藍(lán)色熒光，Dylight 488是綠色熒光，可完全替代FITC；完全替代Cy3和Rhodamin的Dylight 549；替代Texas Red的Dylight 594；Dylight 633和Dylight 649則是更強(qiáng)的紅色熒光；另外，Dylight還有適配Odyssey系統(tǒng)的近紅外和遠(yuǎn)紅外二抗，分別是Dylight 680和DyLight 800。

FITC本身性質(zhì)穩(wěn)定，能與蛋白質(zhì)結(jié)合，是檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)最常用的熒光探針。它還能標(biāo)記抗體，可用于免疫組織化學(xué)單染或多重染色。FITC熒光二抗主要優(yōu)點(diǎn)是人眼對(duì)黃綠色較為敏感，通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。缺點(diǎn)是在光照下 易淬滅，易受自發(fā)熒光影響。實(shí)際上，F(xiàn)ITC熒光二抗的最大缺點(diǎn)是淬滅快，因此要和抗淬滅劑一起使用。DyLight 488則完全不一樣，如右圖所示，不同熒光團(tuán)在含有抗淬滅劑（90%甘油的PBS）里的熒光淬滅情況，由圖可見(jiàn)。FITC的淬滅最快，Cy2其次，而Dylight 488和Alexa 488都具有很好的光穩(wěn)定性。因此DyLigt非常適合熒光拍照。那么Dylight到底是一種什么樣的熒光團(tuán)？不管在結(jié)構(gòu)以及功能和應(yīng)用上，Dylight都是一種新的熒光團(tuán)，與傳統(tǒng)的熒光團(tuán)相比，其分子量相對(duì)較小， 因此一個(gè)大分子上可以標(biāo)記更多的Dylight，同時(shí)單個(gè)的Dylight熒光團(tuán)，其熒光強(qiáng)度更強(qiáng)，特異性更好；Dylight對(duì)光更穩(wěn)定，這意味著其具 有更高的抗淬滅性，不像FITC因?yàn)榭焖侔l(fā)生淬滅而無(wú)法及時(shí)捕捉到熒光圖像。

可能還需要考慮的一個(gè)問(wèn)題是價(jià)格的問(wèn)題，其實(shí)Dylight的熒光二抗與常規(guī)熒光二抗相比，具有更高的性價(jià)比，一般來(lái)說(shuō)，Dylight的價(jià)格比常規(guī)二抗 只高20%左右，但是Dylight的效價(jià)通常是常規(guī)熒光二抗的2-4倍左右，因此就最終的性價(jià)比，Dylight更勝一籌。舉例來(lái)說(shuō)，EarthOx的 FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗（貨號(hào)為E031210），100μl和500μl報(bào)價(jià)分別是￥160和￥640；而相應(yīng)的EarthOx的 Dylight 488標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗（貨號(hào)為E032210），100μl和500μl報(bào)價(jià)分別是￥200和￥800，但是在具體使用時(shí)，比如免疫熒光實(shí)驗(yàn)，其推薦稀釋比率分別為1:100和1:400，即100μl和500μl的FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG二抗（貨號(hào)為E031210）最終使用液是 10ml和50ml，而100μl和500μl的Dylight 488標(biāo)記山羊抗小鼠IgG二抗（貨號(hào)為E032210）最終使用液是40ml和200ml，可見(jiàn)，即使不考慮Dylight更高的熒光強(qiáng)度、更好的光學(xué) 穩(wěn)定性和特異性，但就價(jià)格來(lái)說(shuō)，Dylight熒光二抗也具有更高的性價(jià)比。下圖為EarthOx原裝進(jìn)口DyLight 488標(biāo)記，針對(duì)不同種屬的二抗產(chǎn)品，艾美捷均提供現(xiàn)貨包裝：

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