隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和人民生活水平的迅速提高，食品安全快速檢測(cè)技術(shù)逐步受到重視，涌現(xiàn)出了不少新的技術(shù)和產(chǎn)品，到目前已有五十多種。蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)作為最早開(kāi)發(fā)的項(xiàng)目，其技術(shù)和產(chǎn)品也最為成熟，成為食品安全檢測(cè)的必檢項(xiàng)目。
經(jīng)過(guò)二十年的不懈努力，為我國(guó)農(nóng)殘快速檢測(cè)作出了重要的貢獻(xiàn)。2001年農(nóng)業(yè)部發(fā)布了蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T 448-2001），接著衛(wèi)生部又頒布了蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法（GB/T 5009.199-2003），這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)都采用了基于昆蟲(chóng)毒理學(xué)之膽堿酯酶抑制原理而建立起來(lái)的酶抑制率法（分光光度法），我們不但提供了成熟的技術(shù)和產(chǎn)品，而且積極參與了標(biāo)準(zhǔn)的制定工作。
一、檢測(cè)原理
在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常條件下，膽堿酯酶(ChE)催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物類(lèi)似物（碘化硫代乙酰膽堿ATCI或碘化硫代丁酰膽堿BTCI）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑（二硫代二硝基苯甲酸DTNB）發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)或農(nóng)殘測(cè)試儀在412nm處測(cè)定吸光度的變化值（△A），計(jì)算出抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的存在。
對(duì)于酶抑制率法來(lái)說(shuō)，膽堿酯酶制劑是最為關(guān)鍵的因素，其質(zhì)量技術(shù)水平?jīng)Q定了檢測(cè)的靈敏度、穩(wěn)定性和可靠性。膽堿酯酶制劑的研發(fā)工作一直是本公司的重點(diǎn)，我們研究了大量的酶源材料，在提取方法和保持酶活性穩(wěn)定技術(shù)等方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，是目前國(guó)內(nèi)唯一可以根據(jù)客戶需求，生產(chǎn)不同靈敏度和活性的液體酶制劑的生產(chǎn)廠家，產(chǎn)量和質(zhì)量都一直處于國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平，其中比較有代表性的產(chǎn)品如下：

農(nóng)殘速測(cè)試劑 按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009.199-2003配制 500份裝/套
緩 沖 劑 10包 每包加500mL蒸餾水或純凈水溶解 常溫存放
膽堿酯酶 10瓶 不用配制，直接取用 4℃冰箱保存 每份加100μL
顯 色 劑 2瓶 加25mL緩沖液溶解 4℃冰箱保存 每份加100μL
底 物 4瓶 加12.5mL蒸餾水或純凈水溶解 4℃冰箱保存 每份加100μL
或者加2.5mL蒸餾水或純凈水溶解 4℃冰箱保存 每份加20μL
酶 活 力 空白對(duì)照1分鐘吸光度變化值(ΔΑ0）在0.15-0.3之間。

使用方法：請(qǐng)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 5009.199-2003操作，或根據(jù)農(nóng)藥殘留測(cè)試儀的使用說(shuō)明進(jìn)行測(cè)試。
1、使用方法
取2g果蔬樣品（塊莖類(lèi)取4g)，葉菜剪成1cm左右見(jiàn)方的碎片，塊莖類(lèi)取橫截面樣品或取其表皮，放入三角瓶中，加入10mL緩沖液，振蕩1～2min ，倒出提取液，靜置2min，待測(cè)。若提取液混濁或雜質(zhì)太多可過(guò)濾后再測(cè)。
2、測(cè)試
對(duì)照測(cè)試：于反應(yīng)瓶中加入2.5mL緩沖液，再分別加入100μL酶液和顯色劑，混勻，靜置反應(yīng)10min后加入100μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，及時(shí)放入儀器的測(cè)量室第1通道，合上蓋。按〈B〉鍵，顯示屏下方延遲10s后，測(cè)量時(shí)間開(kāi)始倒計(jì)時(shí)180s，計(jì)時(shí)完畢，顯示屏顯示吸光度增量及抑制率。在進(jìn)行對(duì)照測(cè)試時(shí)，2～8通道可同時(shí)進(jìn)行樣品測(cè)試。
樣品測(cè)試：于反應(yīng)瓶中加入2.5mL待測(cè)液，再分別加入100μL酶液和顯色劑，混勻，靜置反應(yīng)10min后加入100μL底物，搖勻并立即倒入比色杯中，及時(shí)放入儀器的測(cè)量室通道，合上蓋。按〈M〉鍵，顯示屏下方延遲10s后，測(cè)量時(shí)間開(kāi)始倒計(jì)時(shí)180s，計(jì)時(shí)完畢，顯示屏顯示吸光度增量及抑制率。數(shù)據(jù)自動(dòng)保存，如有需要按〈P〉鍵打印。
3、結(jié)果判定
以分光光度計(jì)測(cè)試(412 nm波長(zhǎng))時(shí)，按下式計(jì)算抑制率：
抑制率(%)=[(ΔΑ0－ΔΑt )/ΔΑ0]×100
以農(nóng)藥殘留快速測(cè)試儀檢測(cè)時(shí)其抑制率一般可自動(dòng)計(jì)算。若樣品抑制率≥50%，表示樣品農(nóng)殘超標(biāo)，為陽(yáng)性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果的樣品需做2次以上重復(fù)檢測(cè)，多次檢測(cè)仍呈陽(yáng)性需用氣相色譜等儀器做進(jìn)一步確認(rèn)。
二、檢測(cè)靈敏度
由于采用的標(biāo)準(zhǔn)方法的不同，取樣量、檢測(cè)程序和判定標(biāo)準(zhǔn)也有所不同，如國(guó)標(biāo)法以抑制率≥50%判定為陽(yáng)性，而農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)則以抑制率≥70%判定為陽(yáng)性。我們進(jìn)行了大量的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在實(shí)際檢測(cè)中，兩種方法的最終檢測(cè)靈敏度還是基本一致的。我們用農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)農(nóng)殘速測(cè)試劑的最低檢測(cè)限進(jìn)行了多次測(cè)試，并通過(guò)了中國(guó)廣州分析測(cè)試中心和農(nóng)業(yè)部蔬菜水果質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(廣州)等專業(yè)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的檢測(cè)驗(yàn)證，結(jié)果如下：

農(nóng)殘速測(cè)試劑對(duì)幾種常見(jiàn)農(nóng)藥的最低檢測(cè)限(mg/kg)
農(nóng)藥名稱 最低檢測(cè)限 農(nóng)藥名稱 最低檢測(cè)限 農(nóng)藥名稱 最低檢測(cè)限
敵敵畏 0.01 毒死蜱 0.5 滅多威 0.1
好年冬 0.05 馬拉硫磷 0.5 敵百蟲(chóng) 0.1
辛硫磷 0.1 樂(lè)果 1.0 呋喃丹 0.05
甲胺磷 0.2 氧化樂(lè)果 0.6 對(duì)硫磷 0.4


注：在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，最低檢測(cè)限可能會(huì)隨產(chǎn)品種類(lèi)和酶活性的變化而有所波動(dòng)，并可以根據(jù)客戶的具體需求做出調(diào)整。
三、保存條件及保質(zhì)期
本公司的農(nóng)殘速測(cè)試劑穩(wěn)定性較好，可以常溫運(yùn)輸或郵寄，長(zhǎng)期存放應(yīng)在4℃冰箱中，保質(zhì)期為12個(gè)月；室溫或常溫保存時(shí)，保質(zhì)期為3～6個(gè)月。
四、注意事項(xiàng)
1、任何試劑使用時(shí)，用一瓶打開(kāi)一瓶，用完后才使用新的，防止試劑變質(zhì)。
2、酶、底物和顯色劑碰到一起會(huì)馬上發(fā)生生化反應(yīng)，移液器和容器都應(yīng)各自貼上標(biāo)簽，單獨(dú)使用，以免交叉污染。
3、從任何試劑瓶吸出的試劑，禁止再次注射回試劑瓶。
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