概述

這個(gè)呋喃唑酮ELISA檢測(cè)試劑盒用于定量檢測(cè)樣品中的呋喃唑酮代謝產(chǎn)物的含量。如果要確證，可以采用傳統(tǒng)的檢測(cè)方法如：HPLC, GC/MS。

原理

這個(gè)呋喃唑酮（AOZ）ELISA檢測(cè)試劑盒的原理是酶聯(lián)免疫，應(yīng)用于測(cè)定呋喃唑酮。在微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)和樣品，再加入AOZ-HRP酶結(jié)合物，微孔板包被有呋喃唑酮（AOZ）特異性抗體。這時(shí)樣品中的呋喃唑酮和呋喃唑酮酶結(jié)合物競(jìng)爭(zhēng)于包被在微孔板上的呋喃唑酮抗體結(jié)合。這個(gè)反應(yīng)進(jìn)行30min。經(jīng)過(guò)洗板步驟，加入底物（顯色劑）。通過(guò)顯色劑來(lái)檢測(cè)呋喃唑酮。底物（顯色劑）含有雙氧水和TMB。結(jié)合到呋喃唑酮抗體上的AOZ-HRP酶結(jié)合物催化底物產(chǎn)生有色物質(zhì)。經(jīng)過(guò)一個(gè)反應(yīng)期加入稀酸（終止液）終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀讀數(shù)。通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)測(cè)定樣品中AOZ的含量。因?yàn)锳OZ-HRP酶結(jié)合物和樣品中的AOZ是競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系所以顯色的深淺和樣品中呋喃唑酮的含量成反比。

性能數(shù)據(jù)

敏感性：魚(yú)、蝦、雞 0.1 ppb；混合飼料0.3 ppb

選擇性：這個(gè)試劑盒只能測(cè)呋喃唑酮不能測(cè)定類(lèi)似的化合物

樣品：需要通過(guò)處理樣品來(lái)消除基質(zhì)效應(yīng)

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：測(cè)定時(shí)靠近曲線(xiàn)的中間部位取值更為準(zhǔn)確。

重復(fù)性：標(biāo)準(zhǔn)的變異系數(shù)(CVs) <10%；樣品的變異系數(shù)(CVs) <15%；

交叉反應(yīng)：

Furazolidone (AOZ) 100%

Furaltadone (AMOZ) <0.01%

Semicarbazide (SEM) <0.01%

1-aminohydantoin (AHD) <0.01%

試劑盒組成

1、真空包裝微孔板（12×8條），包被有AOZ抗體

2、7瓶呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)液，濃度分別為0, 0.0125, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2,和0.5 ppb,每瓶1ml。（已經(jīng)衍生化）

3、呋喃唑酮-HRP酶標(biāo)記物12ml

4、樣品處理緩沖液（10X）濃縮，50ml，用于稀釋樣品。

5、洗液/樣品稀釋液（10X）濃縮，50ml，

6、衍生化試劑 12ml

7、1瓶16mL底物（TMB）

8、1 瓶12mL終止液.

步驟

1、在對(duì)應(yīng)的微孔中加入25 μL 標(biāo)準(zhǔn)或衍生化的樣品。最好做重復(fù)。

2、用排槍在每個(gè)孔中都加入100μL酶標(biāo)記物、然后用紙片蓋住微孔，輕輕震蕩微孔板30秒使孔中的液體混勻。

3、在室溫下孵育30分。

4、將孔里的液體倒入合適的容器中，每個(gè)微孔至少加入250μL、1×洗液，然后棄掉洗液到合適的容器中，重復(fù)洗3次，共四次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。

5、使用排槍在每個(gè)孔中加入100μL底物顯色液，然后用紙片蓋住微孔，輕輕震蕩微孔板30秒使孔中的液體混勻。在室溫孵育20分。盡量使其不見(jiàn)光。

6、每孔加入100μL終止液。

7、在加入終止液15分鐘時(shí)間內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD）。