適用

本試劑盒適用于水產(chǎn)品中孔雀綠的定量檢測。

原理

本試劑盒原理是競爭酶聯(lián)免疫檢測方法，利用萃取劑從樣品中提取到孔雀石綠.在固相載體微孔板中加入標(biāo)準(zhǔn)和處理的樣品，然后加入孔雀石綠抗體，反應(yīng)30分鐘后洗板，然后加入HRP標(biāo)記的孔雀石綠孵育30分后洗板，洗滌后加入顯色劑，結(jié)合的酶將無色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物；加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色；在450nm波長進(jìn)行檢測，樣品中的孔雀石綠濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。

特異性

與孔雀石綠類似物的交叉反應(yīng)
Compound %
CR

Malachite green孔雀石綠
100%

Leucomalachite隱色孔雀綠
1%

Crystal Violet 結(jié)晶紫
120%

Leucocrystal Violet 隱色結(jié)晶紫
2%


檢測限

0.01 ppb

試劑盒組成

96孔酶標(biāo)板：1塊（8×12條）。
標(biāo)準(zhǔn)品貯備液（Standard）: 1瓶（0.4ml/瓶），100ppb。

酶標(biāo)記物：1瓶（25倍, 0.8ml）HRP標(biāo)記的孔雀石綠結(jié)合物

孔雀石綠抗體：1瓶（9ml）

底物顯色液：1瓶（16ml）

終止液：1瓶（12ml 、1N HCl）。

結(jié)合物稀釋液：1瓶（15ml）。

樣本稀釋緩沖液：2瓶（25ml）

濃縮洗滌液：1瓶（5倍， 100ml/瓶）、酶標(biāo)板的洗滌。

使用說明書



操作步驟

2．從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。

3.用移液器吸取75 μl 樣品處理物到對應(yīng)的測試孔 ，同時(shí)在每個(gè)孔中都加入75 μl 抗體溶液。

4.輕輕震動(dòng)30秒使其混勻孵育30分。

5.孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板緩沖液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul，微震蕩洗滌后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板。拍板，去掉殘留的洗液。

6.每個(gè)孔加入150 μL 酶標(biāo)結(jié)合物.

7.輕輕震動(dòng)30秒使其混勻孵育30分

8.孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板緩沖液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul，微震蕩洗滌后倒掉，重復(fù)三次，總共四次洗板。拍板，去掉殘留的洗液。

9.每個(gè)孔加入150 μL 底物.孵育30分

10.每孔加入 100 μL 終止液.

11.450nm下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD）

結(jié)果分析

1．半定量結(jié)果的判定，可根據(jù)樣品的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值來判定，樣品的吸光度值低于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的孔雀石綠含量大于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度，樣品的吸光度值高于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的孔雀石綠含量小于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度。

2．定量結(jié)果判定，需要以標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)濃度的對數(shù)為Y軸繪制曲線圖，將標(biāo)準(zhǔn)濃度吸光度值的點(diǎn)用直線連接，樣品的吸光度值也位于這條直線上，根據(jù)樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相應(yīng)樣品的濃度，如果樣品的吸光度值大于最小標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值或小于最大標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，即可說明此樣品中孔雀石綠的含量小于0.01ppb或大于1ppb。

3.當(dāng)樣品的濃度高于1ppb時(shí)要調(diào)節(jié)稀釋倍數(shù)來獲得最終的濃度。