iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技術是分別由美國AB Sciex公司和Thermo Fisher公司研發(fā)的多肽體外標記定量技術。這兩種技術采用多個（2-10）穩(wěn)定同位素標簽，特異性標記多肽的氨基基團進行串聯(lián)質(zhì)譜分析，能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對含量，可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達水平的差異。

對于可以傳代的細胞樣品來說，我們可以采取SILAC的方法完成對于細胞蛋白質(zhì)組的標記過程，但是許多其他研究體系，比如組織樣品以及不能進行傳代培養(yǎng)的細胞來說，需要其他的標記方法來完成定量蛋白組學分析。TMT, iTRAQ等基于體外（in vitro）標記的定量方法應運而生。

iTRAQ標簽包括三部分，如下圖：

1. 報告基團（reporter group）：指示蛋白樣品豐度水平。
2. 平衡基團（balance group）：平衡報告基團的質(zhì)量差，使等重標簽重量一致，保證標記的同一肽段m/z相同。
3. 肽反應基團（amine-specific reactive group)：能與肽段N端及賴氨酸側鏈氨基發(fā)生共價連接，從而標記上肽段。

iTRAQ和TMT標簽結構圖

來自不同樣品的同一肽段經(jīng)TMT/iTRAQ試劑標記后具有相同的質(zhì)量數(shù)，并在一級質(zhì)譜檢測（MS1）中表現(xiàn)為同一個質(zhì)譜峰。當此質(zhì)譜峰被選定進行碎裂后，在二級質(zhì)譜檢測（MS2）中，不同的報告基團被釋放，它們各自的質(zhì)譜峰的信號強弱，代表著來源于不同樣品的該肽段及其所對應的蛋白的表達量的高低。TMT/iTRAQ定量蛋白組學研究因其測定精準度高適應樣品種類多，目前已有很廣泛的應用。百泰派克在傳統(tǒng)的TMT/iTRAQ分析技術的基礎上，提供TMT/iTRAQ/MultiNotch MS分析技術，使用三級碎片報告離子進行定量，可進一步提高TMT/iTRAQ定量蛋白組學分析的精度，進一步提高定量準確性。

百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺，Orbitrap Fusio Lumos質(zhì)譜平臺結合Nano-LC，推出基于TMT/iTRAQ/MultiNotch MS的定量蛋白組分析服務技術包裹，您只需要將您的實驗目的告訴我們并將您的蛋白寄給我們，我們會負責項目后續(xù)所有事宜，包括蛋白酶切、肽段標價、肽段分離、質(zhì)譜分析、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)分析、生物信息學分析。

iTRAQ/TMT定量蛋白組學分析實驗流程

iTRAQ 8-plex定量蛋白組學分析流程

iTRAQ/TMT定量蛋白組學分析技術特點

? 高通量定量蛋白分析：可以同時分析10個樣品；適合大量臨床樣本，多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物
? 體外標記，適用于分析組織，細胞，血液等多種樣品
? 質(zhì)譜分析靈敏度高，可檢測較低豐度蛋白，大范圍比較蛋白相對豐度
? 可與富集磷酸化等修飾肽段的方法聯(lián)用，更準確研究翻譯后修飾變化

iTRAQ/TMT定量蛋白組學分析樣品要求

注意：樣品運輸請使用足量的干冰運輸，并且盡量選用較快的郵遞方式，以降低運輸過程中樣品降解的可能性。

中/英文項目報告

在技術報告中，百泰會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：

1, 實驗步驟（中英文）; 2, 相關的質(zhì)譜參數(shù)（中英文）; 3, 鑒定的氨基酸的詳細信息; 4, 質(zhì)譜圖片; 5, 原始數(shù)據(jù)

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