微囊藻毒素檢測試劑盒
適用
北京普華仁生物技術(shù)開發(fā)有限公司提供的微囊藻毒素檢測試劑盒適用于水中微囊藻毒素的定量檢測。

檢測原理
微囊藻毒素檢測試劑盒由可以和微囊藻毒素及微囊藻毒素酶標(biāo)記物結(jié)合的多克隆抗體制成。樣品中的微囊藻毒素與微囊藻毒素酶標(biāo)記物競爭結(jié)合數(shù)量有限的抗體結(jié)點。
檢測過程中， 先加入微囊改造毒素酶標(biāo)記物及含有微囊藻毒素的樣品到測試孔中接著加入抗體，酶標(biāo)記物與樣品中的微囊藻毒素競爭結(jié)合同樣的抗體的結(jié)合點。測試孔中包被有抗兔IgG，用于捕獲加入的兔抗微囊藻毒素抗體。
孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的分子。每孔中加入干凈的底物溶液，連接的酶結(jié)合物可以將底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色化合物，一個酶分子可以轉(zhuǎn)化多個底物分子。
由于各個孔中抗體可結(jié)合位點是相同的，并且加入的微囊藻毒素酶標(biāo)記物的量也是相同的，樣品中微囊藻毒素含量低的則酶標(biāo)記物結(jié)合得多，顏色會顯深藍(lán)色。反之，樣品中微囊藻毒素含量高的則酶標(biāo)記物結(jié)合得少，顏色會顯淺藍(lán)色。
注意：顏色與微囊藻毒素的含量成反比。
較深的顏色=較低的濃度
較淺的顏色=較高的濃度

特性：
特異性
Beacon微囊藻毒素檢測試劑盒沒有區(qū)分微囊藻毒素-LR(作為標(biāo)準(zhǔn)品)及其它類型，然而可以測到微囊藻毒素的其它類型，以下表格中展示的是相關(guān)值及交叉反映率（%CR），以下所有濃度均為ppb級。
種類 %CR
微囊藻毒素-LR 100
微囊藻毒素-RR 87
微囊藻毒素-YR 48
節(jié)球藻毒素 31

試劑盒組成
?包被有羊抗兔抗體的的微孔板 （12×8條）。
?陰性對照品一瓶（0ppb微囊藻毒素-LR）。
?0.1ppb、0.3ppb、0.8ppb、2ppb微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)品各一瓶。
?1.0ppb微囊藻毒素質(zhì)控樣品一瓶。
?微囊藻毒素HRP酶標(biāo)記物一瓶。
?兔抗微囊藻毒素抗體溶液一瓶。
?底物一瓶。
?停止液一瓶。（注意！1N 鹽酸，小心處理）
?100×清洗液。

注意事項
1.不用時請將試劑盒儲存于4-8℃。
2.不可冷凍試劑盒，不可使其暴露在大于37℃環(huán)境中。
3.開始實驗前，所有試劑達(dá)到室溫。
4.不可使用過期試劑。
5.不同批次的試劑不可混用。
6.使用確證方法確認(rèn)陽性樣品。

需要的試劑和材料
1.酶標(biāo)儀
2.薄膜
3.計時器或表
4.蒸餾水或去離子水
5.振蕩器

檢測程序
1.將所有試劑及樣品置于室溫下。
2.從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3.稀釋100倍濃縮清洗液為1倍清洗液，例：取5ml 100倍清洗液到500ml洗瓶中并加入495ml蒸餾水。
4.吸取50ul酶標(biāo)記物到微孔板的每個孔中。
5.吸取50ul標(biāo)準(zhǔn)，陰性對照，樣品到對應(yīng)微孔中，必須保證每種溶液使用干凈的吸頭吸取，避免交叉污染。
6.加入50ul抗體溶液到每個小孔中。
7.快速震蕩使孔中的溶液混合，并敷上薄膜，或者微孔板可以放在振蕩器上震蕩孵育，從而達(dá)到在孵育期間持續(xù)震蕩的效果。
8.孵育30分鐘。
9.孵育完后，去掉封口膜將微孔中的溶液倒入水槽中，用1倍清洗液清洗完全充滿微孔，震蕩后倒掉，重復(fù)四次，總共五次洗板。在吸水紙上拍打，盡可能將水拍干。
10.每個微孔中加入100ul底物溶液。
11.蓋上小孔并孵育30分鐘。
12.按照加底物的順序每孔中加入100ul停止液。停止液為1 N鹽酸，需小心操作。
13.450nm下讀板，如果酶標(biāo)儀有雙波長，可同時測605或650nm雙波長。
14.如果酶標(biāo)儀可以處理數(shù)據(jù)，可用半對數(shù)線性或4參數(shù)曲線擬合，如果為手動計算，則可按照以下部分進(jìn)行。

計算結(jié)果
1.讀板之后，求標(biāo)準(zhǔn)，陰性對照，樣品的平均吸光度值并按以下方法計算%B0:
標(biāo)準(zhǔn)，陰性對照，樣品吸光度值的平均值
%B0 = --------------------------------------------------------
陰性對照的平均吸光值
2.以%B0為Y軸，以微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)濃度的半對數(shù)值為X軸，繪制曲線。
3.通過每個樣品的B0%，在圖上計算出微囊藻毒素的濃度。
4.如果樣品B0%在設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)B0%范圍之內(nèi)，就可以得出一個具體的濃度值。如果樣品B0%出了范圍只能說明樣品的濃度大于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)或低于低濃度的標(biāo)準(zhǔn)。

質(zhì)量控制
1．1.0ppb質(zhì)控樣的%B0值應(yīng)該處于下面的范圍之內(nèi)：
1.0 ppb Microcystin control              0.80-1.30ppb
2．樣品計算
物質(zhì) 吸光度值 平均吸光度值   ±SD** %RSD %B0 濃度(ppb)
陰性對照 1.478
1.552 1.515±0.052 3.4 100 N/A
0.1 1.255
1.194 1.225±0.043 3.5 80.8 N/A
0.3 0.941
0.932 0.937±0.006 0.68 61.8 N/A
0.8 0.626
0.602 0.614±0.017 2.7 40.5 N/A
2.0 0.389
0.386 0.302±0.008 0.54 25.6 N/A
樣品 0.610
0.634 0.622±0.017 2.7 31.5 0.909

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質(zhì)量保證，歡迎索取詳細(xì)資料，咨詢洽談。

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