SLP Reagent Set (呼吸道真菌感染快速檢測(cè))――肽聚糖和(1→3)-β-葡聚糖定量檢測(cè) SLP Reagent Set (呼吸道真菌感染快速檢測(cè)) ――肽聚糖和(1→3)-β-葡聚糖定量檢測(cè) 家蠶的淋巴有一種自我保護(hù)機(jī)制，被稱為“酚氧化酶原串聯(lián)反應(yīng)”。當(dāng)受外界入侵（如細(xì)菌和真菌）時(shí)，這個(gè)串聯(lián)反應(yīng)參與黑色素的形成并使機(jī)體免受攻擊。這個(gè)反應(yīng)由細(xì)菌中的肽聚糖或是真菌、酵母中的(1→3)-β-葡聚糖引發(fā)，該反應(yīng)中的酚氧化酶原被激活。也有人認(rèn)為絲氨酸蛋白酶也參與了該反應(yīng)，但是沒(méi)有從這方面闡述的資料。 已消毒的SLP包括了所有參與該反應(yīng)的因子，再生后的溶液中含有L-3,4-二羥基苯丙氨酸(L-3,4-dihydroxyphenylalanine, DOPA)，該物質(zhì)可以作為肽葡聚糖或β-葡聚糖所激發(fā)的酚氧化酶的底物，DOPA被酚氧化酶氧化，形成黑色素。肽聚糖是絕大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞壁的組成成分，而β-葡聚糖廣泛的分布于真菌的細(xì)胞壁中。因此，SLP通過(guò)測(cè)定黑色素的形成情況，進(jìn)而定性或定量檢測(cè)細(xì)菌和真菌的污染。 特點(diǎn) 1. 用于肽聚糖和(1→3)-β-葡聚糖的定量檢測(cè)，檢測(cè)敏感。 2. 使用酶標(biāo)儀或內(nèi)毒素檢測(cè)儀，能對(duì)肽葡聚糖和β-葡聚糖精確定量。 3. 不需任何特殊器械即可通過(guò)肉眼檢測(cè)出細(xì)菌和真菌的污染。 4. 凍干SLP的在2-10℃至少可保存18個(gè)月。 SLP的作用機(jī)制見(jiàn)圖1所示。肽葡聚糖或是(1→3)-β-葡聚糖能分別和被稱為PGRP或βGRP的反應(yīng)識(shí)別蛋白相偶聯(lián)。酚氧化酶原轉(zhuǎn)化為酚氧化酶。然后，酚氧化酶催化DOPA氧化，同時(shí)，反應(yīng)液中產(chǎn)生黑色素。過(guò)一段時(shí)間(約1h)，可通過(guò)肉眼判斷反應(yīng)混合物的顏色變化；反應(yīng)液中有黑色素生成的為陽(yáng)性，其它的為陰性。 當(dāng)使用酶標(biāo)儀或內(nèi)毒素檢測(cè)儀時(shí)，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)的始動(dòng)時(shí)間和由顏色變化而導(dǎo)致的吸光度的變化，即可對(duì)肽葡聚糖或β-葡聚糖進(jìn)行定量。 所含試劑（所有試劑均存放于2-10℃）： 1. 凍干SLP for 3ml 使用酶標(biāo)儀或者目測(cè)約50Test，使用內(nèi)毒素檢測(cè)儀約30Test 2. 凍干底物 for 3ml 含有作為酚氧化酶底物的DOPA 3. 稀釋液 4ml 含有g(shù)ood’s buffer 試劑準(zhǔn)備： (A) 底物中加入3ml稀釋液，輕輕搖晃至底物完全溶解，注意避免碰到橡膠帽。 (B) 所有底物溶液加入凍干的SLP中，輕輕搖晃至SLP完全溶解，同樣，注意避免碰到橡膠帽。此溶液即為SLP檢測(cè)液。 操作步驟 1. 使用酶標(biāo)板(微孔板)目測(cè) (A) 分別稀釋肽聚糖和β-葡聚糖參照物，做兩個(gè)不同濃度的參照系列，每孔加入0.05ml的參照物稀釋液或者待測(cè)樣品 (B) 每孔加入0.05mlSLP檢測(cè)液 (C) 溫和搖晃后，酶標(biāo)板于30℃孵育一小時(shí) (D) 肉眼判斷：反應(yīng)液中有黑色素生成的為陽(yáng)性，其它的為陰性。 (E) 參考物的最低濃度（即能生成黑色素的最小濃度）不應(yīng)在SLP檢測(cè)液的最低檢測(cè)濃度以下。 (F) 樣品中SLP反應(yīng)物濃度是否在SLP檢測(cè)液濃度的最低檢測(cè)范圍內(nèi)，決定了樣品是陽(yáng)性或陰性。 2. 使用酶標(biāo)儀檢測(cè) (A) 樣品和參考物的稀釋系列各0.05ml分別加入酶標(biāo)板孔中 (B) 迅速在每孔中加入0.05mL SLP檢測(cè)液。最好用消毒過(guò)的加液器。 (C) 在以下條件下使用酶標(biāo)儀上測(cè)定光吸收值： 檢測(cè)波長(zhǎng)： 650nm 檢測(cè)模式： 動(dòng)態(tài)檢測(cè) 反應(yīng)時(shí)間： 90分鐘 檢測(cè)溫度： 30℃ 自動(dòng)混勻： 一次 (D) 繪制雙對(duì)數(shù)回歸(regression of Log-Log)標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫軸為SLP參考物的濃度，堅(jiān)軸為反應(yīng)時(shí)間 (E) 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線上的反應(yīng)始動(dòng)時(shí)間，計(jì)算SLP反應(yīng)物質(zhì)的濃度。 3. 使用內(nèi)毒素檢測(cè)儀做SLP檢測(cè)，其操作步驟可以按照儀器生產(chǎn)商提供的操作手冊(cè)中所述的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法操作。內(nèi)毒素檢測(cè)儀可能會(huì)發(fā)出反應(yīng)混合液缺乏透射光的信號(hào)。忽視這個(gè)的警告，測(cè)定結(jié)果不會(huì)受此影響。 關(guān)聯(lián)試劑： 297-51501 SLP Reagent Set （定量的需要另配以下標(biāo)準(zhǔn)品使用） 162-18101 Peptidoglycan, from Micrococcus luteus肽聚糖 2ml 030-09903 Curdlan (1→3)-β-葡聚糖 1g 注意事項(xiàng) 1. 器械應(yīng)250℃干熱滅菌至少2小時(shí)，并避免被SLP反應(yīng)物污染 2. SLP凍干粉溶解后，其溶液應(yīng)存于0-4℃,并盡早使用 3. 注意在器械儲(chǔ)存期間避免其被SLP反應(yīng)物質(zhì)污染 4. SLP檢測(cè)液的敏感性很大程度上受離子強(qiáng)度的影響 5. 該試劑盒僅用于研究，不可用于診斷；僅用于體外，不可用于人或動(dòng)物體內(nèi)。 （本資料只供參考，以原包裝說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)） 常見(jiàn)使用說(shuō)明： 1. 因?yàn)镾LP是被PG（肽聚糖）或BG[(1→3)-β-葡聚糖]所引發(fā)，在操作和使用本試劑時(shí)，單一滅菌器皿或者使用無(wú)熱源器皿都不夠的，必須還要同時(shí)無(wú)PG和BG； 2. 如果是用玻璃器皿，清洗干凈后，需要在250度下干熱滅菌2小時(shí)； 3. 如果是一次性無(wú)菌器皿，在使用之前必須進(jìn)行測(cè)試能否適用于此項(xiàng)檢測(cè)（即注1）； 4. 如果使用過(guò)后還有剩余，我們認(rèn)為其很可能被樣品污染，不建議繼續(xù)使用。以前我們也遇到類(lèi)似的問(wèn)題，但所有的都是因?yàn)槲廴驹斐?。如果用戶一定要保留一些SLP溶液，建議在未使用前進(jìn)行無(wú)菌分裝并0-4℃保存；最好是將SLP凍干粉在無(wú)菌無(wú)污染條件下，按照使用計(jì)劃量預(yù)先分裝后0-4℃保存 上海西寶生物科技有限公司 地址: 上海張江高科技園區(qū)畢升路299弄（第一上海中心）11-502# 郵編: 201204 電話: 021-5027 2975/76/77/78-6221 移動(dòng)總機(jī):13788987962 E-mail:trade@cxbio.com; www.cxbio.com http: //www.cnbio.net (中國(guó)生物網(wǎng))