上海卓康以質(zhì)量為本，樹立“卓康質(zhì)量”是公司的發(fā)展目標(biāo)。我們一直加倍努力，竭盡全力做到不辜負(fù)您的支持與信賴。同時(shí)公司也離不開廣大客戶的幫助支持，真誠(chéng)邀請(qǐng)國(guó)內(nèi)外有實(shí)力的實(shí)驗(yàn)室、生物技術(shù)公司合作，共同發(fā)展。 目前卓康提供的服務(wù)范圍包括：生物合成siRNA、shRNA的制備；轉(zhuǎn)錄編碼shRNA的DNAs、轉(zhuǎn)錄編碼shRNA的質(zhì)粒載體訂購(gòu)；siRNA靶位的設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)選擇分析；siRNA相關(guān)試劑和RNA技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品的代理銷售；重組病毒構(gòu)建包裝；基因蛋白表達(dá)、載體構(gòu)建、多克隆抗體和單克隆抗體制備；多種細(xì)胞學(xué)服務(wù)；常用的分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)儀器、實(shí)驗(yàn)耗材銷售等。 卓康在分子生物學(xué)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，特別抗體制備技術(shù)方面同樣具有豐富經(jīng)驗(yàn)，提供快速、優(yōu)質(zhì)、性價(jià)比高的實(shí)驗(yàn)服務(wù)。 六、代做實(shí)驗(yàn)MicroRNA芯片技術(shù)服務(wù) MicroRNA簡(jiǎn)介 MicroRNA（miRNA）是一類內(nèi)生的、長(zhǎng)度約20-24個(gè)核苷酸的小RNA,是發(fā)夾結(jié)構(gòu)的約70-90個(gè)堿基大小的單鏈RNA前體經(jīng)過Dicer酶加工后生成。其在細(xì)胞內(nèi)具有多種重要的調(diào)節(jié)作用。每個(gè)miRNA可以有多個(gè)靶基因，而幾個(gè)miRNAs也可以調(diào)節(jié)同一個(gè)基因。這種復(fù)雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)既可以通過一個(gè)miRNA來調(diào)控多個(gè)基因的表達(dá)，也可以通過幾個(gè)miRNAs的組合來精細(xì)調(diào)控某個(gè)基因的表達(dá)。隨著miRNA調(diào)控基因表達(dá)的研究的逐步深入，將幫助我們理解高等真核生物的基因組的復(fù)雜性和復(fù)雜的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。 MicroRNA形式 1. pre-miRNA 約70bp含microRNA莖環(huán)結(jié)構(gòu)的pre-miRNA。 制備方式：化學(xué)合成、生物轉(zhuǎn)錄合成、pre-miRNA質(zhì)粒表達(dá)載體、pre-miRNA病毒。 2. pri－miRNA 天然pri－miRNA 從染色體基因文庫(kù)中調(diào)取300bp－1000bp完整的microRNA基因，克隆到質(zhì)粒載體（普通載體或病毒載體），以強(qiáng)大的CMV啟動(dòng)子操縱該300bp－1000bp microRNA。 人工pri－miRNA 選擇一個(gè)完整的microRNA基因，克隆到質(zhì)粒載體（普通載體或病毒載體）。以人工合成的約70bp含miRNA莖環(huán)結(jié)構(gòu)的目標(biāo)pre-RNA替代原pre-RNA，并以pol Ⅱ/pol III 啟動(dòng)子操縱該microRNA結(jié)構(gòu)單元。 三. MicroRNA選擇 ★pre-miRNA是最早采用的microRNA，擁有大量的成功報(bào)道?；瘜W(xué)合成的pre-miRNA制備快捷，可以標(biāo)記熒光等追蹤。缺點(diǎn)是制備的RNA穩(wěn)定性較差，而且，由于制備的microRNA較長(zhǎng)，合成時(shí)RNA的錯(cuò)誤難以避免（當(dāng)合成RNA超過60bp時(shí)，出現(xiàn)一個(gè)堿基錯(cuò)誤率約30％），轉(zhuǎn)錄制備的pre-miRNA穩(wěn)定性較好，但無flank結(jié)構(gòu)，很少使用。質(zhì)粒載體形式的pre－miRNA也因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)microRNA的flank對(duì)于microRNA功能和測(cè)定非常重要，現(xiàn)已逐漸被pri-miRNA取代。 ★人工pri-miRNA效果較pre-miRNA好，也有足夠多的成功使用的經(jīng)驗(yàn)報(bào)道，但這種人工microRNA采用固定的mir155 flank，制備的microRNA功能不及天然原始microRNA，故也逐漸較少使用。 ★原始天然pri-miRNA克隆自天然文庫(kù)的microRNA由于保留了每個(gè)microRNA獨(dú)自的原始天然雙臂結(jié)構(gòu)，效果更好，是近來被首選方法。 ★pre-miRNA或pri-miRNA腺病毒：可以轉(zhuǎn)染大多數(shù)絕細(xì)胞，產(chǎn)品質(zhì)量可靠。缺點(diǎn)是腺病毒有一定的毒性，以往實(shí)驗(yàn)腺病毒毒性并未引起重視，但我們發(fā)現(xiàn)在microRNA實(shí)驗(yàn)中顯得比較突出。另外，制備周期長(zhǎng)，費(fèi)用高也是不容忽視的缺點(diǎn)。 ★慢病毒microRNA：目前最好的microRNA實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品，缺點(diǎn)是慢病毒自身的不足，即制備lenti－virus時(shí)，病毒的質(zhì)量批間差異較大。 ★AAV、或retrovirus microRNA：與腺病毒和lenti－virus microRNA一樣，具有病毒產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)與缺點(diǎn)。 四. MicroRNA產(chǎn)品 產(chǎn)品 制備方式 大小 Pri-microRNA 天然Pri-microRNA庫(kù) 300－1000 bp 約500 bp 質(zhì)粒載體 病毒：腺病毒/慢病毒 人工Pri-microRNA庫(kù)/訂制 質(zhì)粒載體 病毒：腺病毒/慢病毒 Pre-microRNA 合成 約70bp 化學(xué)合成或生物轉(zhuǎn)錄 載體 質(zhì)粒載體 病毒：腺病毒/慢病毒 pri－miRNA庫(kù) ★所有的pri-miRNA都是從人類基因組DNA中擴(kuò)增出來的，其長(zhǎng)度大約為300bp－1000bp。 ★microRNA完全忠實(shí)于細(xì)胞內(nèi)的天然結(jié)構(gòu),具有更高的效率。 ★microRNA表達(dá)質(zhì)粒載體，可以直接使用。microRNA轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)單元已經(jīng)構(gòu)建到基于FIV的慢病毒載體，同時(shí)與卓康公司的腺病毒系統(tǒng)完全兼容，方便制備病毒。 ★EGFP和miRNA在CMV啟動(dòng)子的引導(dǎo)下共表達(dá)。 ★microRNA質(zhì)粒經(jīng)過嚴(yán)格測(cè)序。 ★部分制備的microRNA質(zhì)?；虿《窘?jīng)過生物學(xué)測(cè)定，microRNA效果肯定與明確。 ★已經(jīng)完成microRNA列表(部分)，請(qǐng)Email咨詢查找其它的miRNA。 miRNA 名稱 測(cè)序結(jié)果 miRNA大小 載體 生物學(xué)測(cè)定 1 hsa-mir-98 ok 562 B Ok 2 hsa-mir-96 ok 511 B Ok 3 hsa-mir-95 ok 495 B Ok 4 hsa-mir-17-92 ok 978 L Ok …… …… …… …… …… 513 hsa-mir-18a 序列錯(cuò)誤 681 L Ok 514 hsa-mir-345 一個(gè)突變 548 L Ok 515 hsa-mir-589 Ok 620 L Ok 516 hsa-mir-219-2 Ok 610 L 517 hsa-mir-215 ok 458 L Ok 518 hsa-mir-212 一個(gè)突變 474 L Ok ...繼續(xù)中 B：同時(shí)有質(zhì)粒、慢病毒質(zhì)粒載體和腺病毒質(zhì)粒載體； L：僅有慢病毒載體。可根據(jù)要求改構(gòu)到您希望的載體。 更多及詳細(xì)microRNA情報(bào)請(qǐng)通過Email：genesil@genesil.com咨詢。 更多新發(fā)現(xiàn)的microRNA請(qǐng)參見MiRBase：http://microrna.sanger.ac.uk/ 2. pri－miRNA或pre－miRNA載體/載體構(gòu)建服務(wù) ★Sunbio有256個(gè)構(gòu)建好的pre－miRNA。 ★pre-microRNA表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建 ①microRNA轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)單元通過增強(qiáng)型Pol III 啟動(dòng)子（hU6, hH1, h7SK, mU6）引導(dǎo)pre-miRNA的過表達(dá)。 ②可選擇帶EGFP熒光標(biāo)簽。 ③終產(chǎn)品均經(jīng)過嚴(yán)格測(cè)序。 ④載體類型：和siRNA一樣，microRNA的效率只與“啟動(dòng)子－miRNA－終止信號(hào)”轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)單元有關(guān)，因此任何質(zhì)粒microRNA作用效果應(yīng)該基本一致，質(zhì)粒小一些對(duì)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率略有好處。卓康公司的microRNA質(zhì)粒與腺病毒、慢病毒系統(tǒng)完全兼容，許多表達(dá)載體已包裝成腺病毒及慢病毒，有數(shù)十種載體可供選擇，請(qǐng)Email咨詢載體情報(bào)。這種pre－microRNA存在不足，請(qǐng)參考MicroRNA簡(jiǎn)介中有關(guān)部分。 ★pri－microRNA表達(dá)質(zhì)粒 ①pre-microRNA＋mir155的microRNA兩臂共同組成pri-microRNA。 質(zhì)?？捎糜谥苯又苽浠贔IV的慢病毒，并同時(shí)與卓康公司的腺病毒系統(tǒng)完全兼容。 ②EGFP和miRNA在CMV啟動(dòng)子的引導(dǎo)下共表達(dá)。 ③終產(chǎn)品均經(jīng)過嚴(yán)格測(cè)序。 ④載體類型：和siRNA一樣，microRNA的效率只與“啟動(dòng)子－miRNA－終止信號(hào)”轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)單元有關(guān)，因此任何質(zhì)粒microRNA作用效果應(yīng)該基本一致，質(zhì)粒小一些對(duì)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率略有好處。卓康公司的microRNA質(zhì)粒與腺病毒、慢病毒系統(tǒng)完全兼容，許多表達(dá)載體已包裝成腺病毒及慢病毒，有數(shù)十種載體可供選擇，請(qǐng)Email咨詢載體情報(bào)。這種pre－microRNA存在不足，請(qǐng)參考MicroRNA簡(jiǎn)介中有關(guān)部分。 3. 生物轉(zhuǎn)錄合成microRNA 產(chǎn)品形式為70bp左右的pre-microRNA。 生物合成的microRNA有較之化學(xué)合成的microRNA有更高的穩(wěn)定性及效率。以卓康專利的高保真RNA生物合成技術(shù)為基礎(chǔ)的microRNA產(chǎn)品有著迄今最好的正確率，從而確保您實(shí)驗(yàn)的成功。這種pre－microRNA存在不足，請(qǐng)參考MicroRNA簡(jiǎn)介中有關(guān)部分。 4. 化學(xué)合成的microRNA 產(chǎn)品形式為70bp左右的pre-microRNA。 化學(xué)合成非?？旖?，您定購(gòu)一周后就可以開始您的實(shí)驗(yàn)。這種pre－microRNA存在不足，請(qǐng)參考MicroRNA簡(jiǎn)介中有關(guān)部分。 5. MicroRNA病毒載體 腺病毒MicroRNA 全部MicroRNA產(chǎn)品均能夠以腺病毒形式提供。 慢病毒MicroRNA 提供慢病毒MicroRNA質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染試劑、包裝細(xì)胞，操作方法。您可以方便地自己制備慢病毒。 上海卓康生物科技有限公司 聯(lián)系電話：021－55660344，021－55063976 傳真：021－55660344 網(wǎng)址：www.elisabio.com 網(wǎng)址：www.antibodybio.com 聯(lián)系人：黃力，業(yè)務(wù)qq: 909447355 公司對(duì)外郵箱：sales@elisabio.com，hyperheal@gmail.com