伏馬毒素（B1, B2,和B3)是由鐮孢菌(霉)屬念珠菌產(chǎn)生的真菌毒素。在世界范圍內(nèi)都發(fā)現(xiàn)了伏馬毒素污染玉米的現(xiàn)象。研究表明伏馬毒素可以誘發(fā)老鼠患肝癌，豬的肺水腫和馬的腦脊髓白質(zhì)病。在一些地區(qū)中玉米中伏馬毒素含量很高，在這些地區(qū)（比如中國和非洲）人的食道癌具有高發(fā)性。

Helic 伏馬毒素試劑盒原理是競爭酶聯(lián)免疫反應(yīng)，用于檢測玉米中的伏馬毒素。

這個HELICA 伏馬素素檢測試劑盒的原理是固相直接競爭酶聯(lián)免疫反應(yīng)。聚苯乙烯微孔板中包被伏馬毒素的特異性抗體，這種抗體和伏馬毒素的各個亞型都有很好的交叉反應(yīng)。利用90%的甲醇從樣品中提取伏馬毒素，把提取的樣品和HRP（辣根過氧化物酶）標(biāo)記的伏馬毒素混勻并加入對應(yīng)的孔檢測。酶標(biāo)記毒素與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的伏馬毒素競爭與包被在微孔底部的抗體結(jié)合。孵育一段時間后，倒出孔里的液體，清洗除去沒有反應(yīng)的物質(zhì)后加入顯色底物（TMB），在酶的作用下孔里將會出現(xiàn)藍色。顯色顏色的深淺與結(jié)合物的量成正比例的關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中伏馬毒素的量成反比例關(guān)系。所以，標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中的伏馬毒素濃度越高，顯色的藍色將會越淺。加入酸，終止反應(yīng)，底物顏色由藍色變?yōu)樽攸S色。微孔板放進酶標(biāo)儀里，在OD_450nm讀取吸光度值。樣品的吸光度值與試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)OD值相比較，相對應(yīng)得出結(jié)果。

1×小袋	抗體包被的微孔板	96孔板（12×8微孔板、包被用鼠源伏馬毒素單克隆抗體）
1板	預(yù)混板（綠色）	96孔板（12×8）沒有包被抗體
6×小瓶	伏馬毒素標(biāo)準(zhǔn)品	1.5mL/瓶，伏馬毒素的濃度分別為2.5, 7.5, 20.0, 50.0, 150.0 ng/mL
2×小瓶	HRP-伏馬毒素偶聯(lián)物	2 x 12mL HRP-伏馬毒素添加防腐劑的緩沖溶液
1×小瓶	底物試劑	15mL TMB，
1×小瓶	終止液	15mL 酸性液體
1×小袋	洗滌緩沖液	0.05%的PBS-Tween20 加入1L蒸餾水

1、使用前將試劑拿到室溫。用1L水溶解PBS-Tween 袋。

2、取出混合板放于微孔支架上用于標(biāo)準(zhǔn)和樣品的測試，取相同數(shù)量的微孔（包被有抗體）置于另一個微孔支架上。

3、在每個混合板微孔中加入先加入100μl 結(jié)合物溶液A(綠色)，然后再加入100ul結(jié)合物溶液B（無色）。

4、在加有結(jié)合物的混合版的孔中加入100 μl 標(biāo)準(zhǔn)或樣品，用槍頭混合3次，

5、轉(zhuǎn)移100ul預(yù)混板微孔中的液體到對應(yīng)的包被有抗體的微孔中，室溫孵育10分鐘，最好使用多道移液器?；旌峡罩械囊后w足夠做兩個平行。

6、將孔里的液體倒入合適的容器中，用蒸餾水或無離子水洗板，然后迅速棄掉洗液到合適的容器中，重復(fù)洗3次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。

7、在吸水紙上拍打，盡可能地將水拍干。

8、每孔加入100 μl底物溶劑，室溫孵育10min。

9、每孔加入 100 μl 終止液。

10、對比標(biāo)準(zhǔn)和樣品的顏色，或在OD450 nm讀數(shù)。

使用實驗獲得的OD值與伏馬毒素0標(biāo)準(zhǔn)的OD值的百分比值與標(biāo)準(zhǔn)中伏馬毒素含量建立劑量效應(yīng)曲線（或直接用OD值與標(biāo)準(zhǔn)的濃度構(gòu)建劑量效應(yīng)曲線）。通過在標(biāo)準(zhǔn)品曲線中添加新數(shù)值計算被測物質(zhì)中伏馬毒素的濃度。因為樣品在處理的過程中稀釋了40倍，所以在計算結(jié)果時要乘以稀釋倍數(shù)40。