本公司提供siRNA 載體的構(gòu)建服務(wù)，siRNA 載體可以在細(xì)胞內(nèi)直接轉(zhuǎn)錄出shRNA ，其干擾效果等同于siRNA ，而且能夠解決 siRNA干擾時間短的缺點(diǎn)。您只需提供需干擾基因的詳細(xì)信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所屬物種，本公司負(fù)責(zé)設(shè)計3條針對目的mRNA的siRNA 靶序列，在短時間內(nèi)構(gòu)建三個可用于目的mRNA干擾實(shí)驗(yàn)的siRNA 載體。可以為您節(jié)省大量的時間與精力。此方法是多種siRNA制備方法中唯一可以進(jìn)行長期基因沉默研究的方法。 閃晶生物siRNA載體構(gòu)建服務(wù)程序： 1. siRNA表達(dá)載體的選用： 本公司選用的siRNA 表達(dá)載體含新霉素抗性基因和GFP綠色螢光標(biāo)記，可以建立穩(wěn)定表達(dá)系，同時可以實(shí)時監(jiān)測載體在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率。載體中還含有Amp抗性基因，可以無限擴(kuò)增。 2. 設(shè)計siRNA靶序列 A 、根據(jù)目的mRNA序列，設(shè)計3條RNA干擾靶序列，靶序列一般為19 － 21nt 長。 B 、對于每條選定的siRNA 靶序列，設(shè)計 siRNA 正義鏈和反義鏈，以 loop(9nt) 相連，稱為 shRNA（short hairpin RNA）。 C、陰性對照的設(shè)立. 3. 合成模板：合成每條編碼 shRNA的DNA 模板的兩條單鏈，退火 DNA 單鏈得到 shRNA 的 DNA 雙鏈模板。模板鏈后面接有RNA PolyIII聚合酶轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn)，同時兩端分別設(shè)計 BamHI 和 HindIII 酶切位點(diǎn)，可以克隆到 siRNA 載體多克隆位點(diǎn)的 BamHI 和 HindIII 酶切位點(diǎn)之間。 4. siRNA 空載體用BamHI和HindIII雙酶切后，1 ％瓊脂糖凝膠電泳，回收線性載體。 5. 連接與轉(zhuǎn)化：把退火的DNA模板雙鏈連接到線性載體中。采用T4連接酶，插入片斷與載體的摩爾比約為 3 ： 1 。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌，在LB Amp培養(yǎng)基上涂板，37 ℃培養(yǎng)過夜。 6. PCR 鑒定 7. 測序鑒定 8.柱抽提陽性克隆載體并定量。 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn) siRNA載體構(gòu)建訂單下載 個數(shù) 價格(￥) 時間 1-3個siRNA表達(dá)載體構(gòu)建 1800.00/個 14個工作日 4－10個siRNA表達(dá)載體構(gòu)建 1500.00/個 20個工作日 10個以上 協(xié)商 協(xié)商 閃晶生物同時提供腺病毒和慢病毒載體的構(gòu)建服務(wù),5000.00元/個. 聯(lián)系電話：021-54460831-11  乘車路線：火車站坐1號地鐵到終點(diǎn),然后換乘5號線到北橋站即可。