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H1人胚胎干細(xì)胞系
產(chǎn)品簡介： 規(guī)格：1×106 cells/管
活細(xì)胞運(yùn)輸：收到細(xì)胞后，請立即放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
凍存細(xì)胞運(yùn)輸：可暫存于-80℃冰箱或液氮長期儲存。
H1人胚胎干細(xì)胞系是國際上最通用胚胎干細(xì)胞系之一，該細(xì)胞是從人類早期胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出來，具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性?？蔀榧?xì)胞遺傳操作和分化研究提供豐富的實(shí)驗(yàn)材料。該產(chǎn)品采用埃澤思生物的人多能干細(xì)胞條件培養(yǎng)基（AC-1001000/AC-1001001）進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)與傳代。本產(chǎn)品經(jīng)檢測H1人胚胎干細(xì)胞系無細(xì)菌、真菌、霉菌、支原體污染，檢測為陰性。
產(chǎn)品組成：
產(chǎn)品貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
AC-2001002H1 | H1人胚胎干細(xì)胞 | 1×106 | 1管 |
實(shí)驗(yàn)材料
iPS人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-2001001）
H9人胚胎干細(xì)胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-2001002H9）
人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001000）
即用型基質(zhì)膠（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001007）
人多能干細(xì)胞消化液（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001008）
Serum-Free干細(xì)胞凍存液（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001012）
磷酸緩沖鹽溶液(Phosphate Buffer Saline，PBS)（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001037）
操作方法（以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作）
H1人胚胎干細(xì)胞復(fù)蘇
1. 實(shí)驗(yàn)操作步驟：
1.1 基質(zhì)膠包被培養(yǎng)板：取出6孔板/12孔板，每孔內(nèi)加入1 mL/0.5 mL即用型基質(zhì)膠（AC-1001007），輕輕晃動6孔板/12孔板使基質(zhì)膠完全覆蓋皿底，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育1h~2h，實(shí)驗(yàn)前拿出并置于超凈工作臺/生物安全柜中室溫下平衡20min。如果暫時不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 儲存，并于1周內(nèi)使用。
注意：①一支凍存的干細(xì)胞的數(shù)量在1×106cells/mL左右，對應(yīng)6孔板1孔；②即用型基質(zhì)膠對溫度敏感，即用即拿，用完后立即放回4℃冰箱保存，且勿用手直接觸碰基質(zhì)膠液面所及的瓶身，影響基質(zhì)膠質(zhì)量。
1.2 先將2~3mL的干細(xì)胞培養(yǎng)基加入15mL離心管中備用。
1.3 解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入37℃溫水中，快速搖動，使其在1~2min內(nèi)快速解凍；
注意：細(xì)胞從液氮中拿出的速度要快，盡量減少其暴露在室溫中的時間。
1.4 離心：凍存管中的凍存液解凍后，將其逐滴加入含有干細(xì)胞培養(yǎng)基的15mL離心管中，將15mL離心管置于低速離心機(jī)中配比平衡后，1000rpm離心3min；
1.5 重懸：離心后棄上清加1mL人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基對干細(xì)胞沉淀進(jìn)行吹吸混勻，吹吸3~5次左右。
1.6 接種：吹吸均勻后，將已經(jīng)平衡好的即用型基質(zhì)膠棄掉，將吹打均勻的干細(xì)胞懸液加入到已經(jīng)包被好的6孔板中，并補(bǔ)全每孔2mL培養(yǎng)體系。
1.7 培養(yǎng)：接種后的6孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細(xì)胞密度以及細(xì)胞團(tuán)塊大小，呈4個細(xì)胞以上的團(tuán)塊較合格，水平十字輕輕晃動6孔板/12孔板使細(xì)胞均勻分布。并置于37℃，5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第2天觀察細(xì)胞貼壁情況；
1.8 換液：從復(fù)蘇的時間開始每24h換液一次。
注意：因培養(yǎng)基中活性成分只足夠維持一天，所以每24h應(yīng)及時更換新鮮培養(yǎng)基。
H1人胚胎干細(xì)胞傳代
2. 實(shí)驗(yàn)具體操作步驟：
2.1 清洗：吸掉原有培養(yǎng)基，貼壁緩慢加入1 mL PBS緩沖液并輕輕晃動，然后沿培養(yǎng)皿邊緣吸去 PBS緩沖液；
2.2 消化：在6孔板中加入2mL/孔人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿底，并置于37℃培養(yǎng)箱中2~5 min；
注意：消化時間依據(jù)干細(xì)胞生長密度，消化時間略有不同，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)一般建議時間2-5min。消化過程中可以拿到倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若在顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣以及克隆內(nèi)部細(xì)胞間出現(xiàn)間隙，即可吸掉消化液終止消化。
2.3 吹打：吸掉消化液后，加入2mL人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底，輕柔吹打3~5次，使皿底干細(xì)胞集落脫落，并將其并轉(zhuǎn)移到15mL離心管中；
注意：吹吸皿底細(xì)胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在3~5次為宜，盡量避免形成單細(xì)胞。如有少量細(xì)胞無法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。
2.4 離心：1000rpm離心3min；
2.5 接種：棄上清，用干細(xì)胞培養(yǎng)基吹打細(xì)胞5-10次，吸掉包被培養(yǎng)板中的基質(zhì)膠，并將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)板中，且補(bǔ)全每孔2mL的培養(yǎng)體系。
注意：吹打細(xì)胞要溫柔，并且吹打次數(shù)不要超過10次，并且
2.6 換液：每24h換液一次。
注意：因培養(yǎng)基中活性成分只足夠維持一天，所以每24h應(yīng)及時更換新鮮培養(yǎng)基。
H1人胚胎干細(xì)胞凍存
3. 實(shí)驗(yàn)具體操作步驟：
3.1 清洗：同2.1；
3.2 消化：同2.2；
3.3 吹打：同2.3；
3.4 離心：同2.4；
3.5 重懸：離心后棄上清，加入2 mL Serum-Free干細(xì)胞凍存液（AC- 1001012）對干細(xì)胞沉淀進(jìn)行吹吸混勻，吹吸3~5次后，將其加入到凍存管中；
注意：凍存液即用即拿，及時放回4℃冰箱。
3.6 記錄：在凍存管上標(biāo)記凍存細(xì)胞種類、時間、操作者及細(xì)胞批次。
3.7 -80℃冰箱凍存：凍存管置于-80℃冰箱過夜。
注意：凍存管放置于-80℃冰箱時，要將凍存管直立放置，切忌凍存管斜放或橫放。
3.8 液氮凍存：24小時后將-80℃冰箱中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中長期凍存。
產(chǎn)品圖片
圖1 人ES細(xì)胞形態(tài)圖 100× 圖2 人ES細(xì)胞熒光染色圖 200×
質(zhì)量控制
檢驗(yàn)項(xiàng)目 Test Catagories | 參考數(shù)據(jù) Reference Data | 結(jié)果 The results |
細(xì)胞形態(tài) Cell morphology | 細(xì)胞呈克隆狀，克隆邊緣光滑 The cells are clonal, with smooth edges | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
無菌 Sterility | 無菌 Sterility | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
支原體 Mycoplasma | 支原體試驗(yàn)為陰性 The mycoplasma test was negative | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
細(xì)胞分化 Cell differentiation | 無 There is no | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |