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人成纖維細(xì)胞無血清培養(yǎng)基
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell?人成纖維細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 |
貨 號(hào) | AC-1001015 |
規(guī) 格 | 500mL |
運(yùn)輸保存條件 | 基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20--80℃ |
使用范圍 | 人真皮/肺/心臟等多種組織器官來源成纖維細(xì)胞培養(yǎng) |
保質(zhì)期 | 12個(gè)月 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
人成纖維細(xì)胞無血清培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell?）自主研發(fā)的一款適用于人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的無動(dòng)物源細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品。本產(chǎn)品應(yīng)用人真皮、肺、心臟等多種組織器官來源成纖維細(xì)胞原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)，且不含動(dòng)物血清，內(nèi)毒素水平低于藥典標(biāo)準(zhǔn)（<0.06EU/mL）。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循ISO9001體系,并符合GMP指導(dǎo)原則。
產(chǎn)品特性
l 無外源動(dòng)物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險(xiǎn)。
l 全程無血清生產(chǎn)，極大降低批次間差異。
l 可用于原代分離。
l 內(nèi)毒素<0.06EU/ml，遠(yuǎn)低于中國(guó)藥典水平。
組分 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 運(yùn)輸 |
人成纖維細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 450mL | 1瓶 | 冰袋 |
人成纖維細(xì)胞添加劑 | 50mL | 1瓶 | 干冰 |
產(chǎn)品內(nèi)容
相關(guān)產(chǎn)品
人真皮成纖維細(xì)胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-2001005）
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操作方法
人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基配制
1.1 37℃快速解凍人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑，快速溶解時(shí)不易破壞添加劑中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，時(shí)間大致為10min。待添加劑融化后搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲(chǔ)存于-20℃至-80℃，避免反復(fù)凍融 。
1.2將添加劑以10%比例加入到人成纖維細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻，即為人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001015）。混合后培養(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲(chǔ)存2-3周，不建議使用已配制超過3周的培養(yǎng)基。
1.3人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基可直接應(yīng)用于人真皮、肺、心臟等多種組織器官來源的成纖維細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)。
操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)
人成纖維細(xì)胞復(fù)蘇(10cm dish)
2.1 從液氮或-80℃冰箱中取出凍存的人成纖維細(xì)胞，迅速放入37℃水浴快速融解。
2.2 在生物安全柜或超凈臺(tái)中，將解凍后的細(xì)胞懸液緩慢加入5 mL預(yù)溫的人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001015）。
2.3 1000rpm 離心3 min，吸掉上清，加入10ml人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
2.4 將細(xì)胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動(dòng)培養(yǎng)皿使細(xì)胞均勻分布，5% CO2的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)。
2.5 24h后更換新鮮人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每2-3天更換培養(yǎng)液。
人成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng)
1. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%，即可傳代。
2. 在超凈臺(tái)/安全柜中，吸掉原有培養(yǎng)基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free細(xì)胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底。
3. 室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-4分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。
4. 加入消化液2倍體積的人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散。
5. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min。
6. 棄上清，加入人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)。1：2-1：4比例傳代，或按2-5x104 cells/cm2 傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意：人成纖維增殖情況與細(xì)胞密度密切相關(guān)，所以傳代時(shí)細(xì)胞密度不宜過稀。
人成纖維細(xì)胞凍存
1. 細(xì)胞達(dá)到90%匯合度， 吸掉原有培養(yǎng)基，PBS清洗一次。
2. 加入Xeno-Free細(xì)胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育4-5min或37℃孵育2-4min分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。
3. 加入消化液2倍體積的人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完全分散。
4. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15 mL離心管中，1000 rpm離心3 min，吸掉上清。
5. 加入適量Serum-free細(xì)胞凍存液（AC-1001006），調(diào)整細(xì)胞凍存密度在1×106 cells/mL左右，每支凍存管分裝1.5-2ml。
6. 直接放入-80℃，24h后轉(zhuǎn)入液氮中長(zhǎng)期保存。
質(zhì)量控制
檢驗(yàn)項(xiàng)目 Test Catagories | 參考數(shù)據(jù) Reference Data | 結(jié)果 The results |
外觀 Physical APPearance | 橙紅色液體 Orange-red liquid | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
澄清度 Clarity | 澄清 Clear | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
pH值 Ph value | 6.9-7.3 | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
滲透壓 Osmolality | 270-340 （mosm/KgH2O） | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
細(xì)菌內(nèi)毒素 Endotoxin | 小于0.06 EU/ml | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
無菌 Sterility | 無菌 Sterility | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
支原體 Mycoplasma | 0.11um過濾，支原體試驗(yàn)為陰性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |