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人間充質干細胞成骨分化試劑盒
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell?人間充質干細胞成骨分化試劑盒 |
貨 號 | AC-1001027 |
規(guī) 格 | 1kit |
保存條件 | 基礎培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20--80℃保存； 混合后2-8℃保存，2-3周內使用完畢 |
使用范圍 | 人間充質干細胞誘導分化成骨 |
保質期 | 1年 |
產(chǎn)品簡介
人間充質干細胞成骨分化試劑盒是埃澤思生物（Applied CellTM）自主研發(fā)的一款用于人間充質干細胞誘導成骨分化的產(chǎn)品，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質干細胞的誘導成骨分化。
產(chǎn)品特性
l 誘導分化程序簡單便捷。
l 誘導成骨細胞效率高。
產(chǎn)品內容
試劑 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 運輸 |
人間充質干細胞成骨分化基礎培養(yǎng)基 | 90mL | 1 瓶 | 冰袋 |
人間充質干細胞成骨分化添加劑 Osteogenic Differentiation Supplement | 10mL | 1瓶 | 干冰 |
1. 相關材料
? Xeno-Free人間充質干細胞培養(yǎng)基（Applied Cell?:AC-1001003）
? 人間充質干細胞成骨分化試劑盒（Applied Cell?:AC-1001027）
? 成骨檢測染液（Applied Cell?:AC-1001021）
? Xeno-Free細胞消化液（Applied Cell?:AC-1001024/1001025）
? 磷酸鹽緩沖液(1×PBS) （Applied Cell?: Cat.AC-1001037）
2. 實驗準備
人間充質干細胞成骨分化培養(yǎng)基配制：
2.1 2-8℃解凍人間充質干細胞成骨分化添加劑，輕晃搖勻；
2.2 隨后將添加劑依次加入到人間充質干細胞成骨分化基礎培養(yǎng)基中（添加劑10mL與90mL基礎培養(yǎng)基徹底混合）混勻，即為人間充質干細胞成骨分化培養(yǎng)基。人間充質干細胞成骨分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲存2-3周。
注意：人間充質干細胞成骨分化添加劑只能在2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請用培養(yǎng)基潤洗添加劑試管1-2次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。
3.實驗操作
3.1誘導成骨（以6孔板為例）
3.1.1 使用細胞細胞包被液包被細胞培養(yǎng)板，將傳代或復蘇凍存的人間充質干細胞接種到6孔板上，密度為2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當細胞匯合度達到80%-90%時，小心的將孔內人間充質干細胞培養(yǎng)基吸掉，向6孔板中加入2 mL人間充質干細胞成骨分化培養(yǎng)基,以此記為第0天；
注意：成骨分化容易使細胞卷起，，成骨分化時應使用包被液包被細胞培養(yǎng)板。
3.1.2 每隔1-2天更換新鮮的人間充質干細胞成骨分化培養(yǎng)基；
注意：為防止成骨細胞脫落，建議成骨過程中出現(xiàn)大量鈣結節(jié)之后，換液形式變?yōu)槊?/span>天一次半量換液。
3.1.3 誘導14-21天期間，視細胞的形態(tài)變化及生長情況（如圖1所示），可用成骨檢測染液（Applied Cell:AC-1001021）進行染色。
人間充質干細胞在誘導成骨分化2天(A)、6天（B）、14天(C)的細胞照片，可以觀察到成片的鈣結節(jié)（100×）
3.2 成骨檢測染液染色
3.2.1 誘導成骨分化結束后，吸掉6孔板中的成骨分化培養(yǎng)基，用PBS沖洗1-2次。每孔加入1 mL細胞固定液，固定10~30 min；
3.2.2 吸掉細胞固定液，PBS沖洗2次。每孔加入2 mL成骨檢測染液，染色3-5 min；
3.2.3 吸掉成骨檢測染液，用PBS沖洗2-3次；
3.2.4 將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察成骨染色效果（如圖2所示）。
人間充質干細胞在誘導成骨后成骨檢測染液染色前（D）和染色后(E)的照片（200×）