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人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化試劑盒
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell? 人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化試劑盒 |
貨 號(hào) | AC-1001028 |
規(guī) 格 | 1kit |
保存條件 | 基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20--80℃保存； 混合后2-8℃保存，3周內(nèi)使用完畢 |
使用范圍 | 人間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成軟骨 |
保質(zhì)期 | 1年 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell?）自主研發(fā)的一款用于人類間充質(zhì)干細(xì)胞分化成軟骨產(chǎn)品，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)成軟骨分化。
產(chǎn)品特性
l 誘導(dǎo)分化程序簡(jiǎn)單便捷。
l 誘導(dǎo)成軟骨細(xì)胞效率高。
產(chǎn)品內(nèi)容
試劑 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 運(yùn)輸 |
人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 90mL | 1 瓶 | 冰袋 |
人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化添加劑 | 10mL | 1瓶 | 干冰 |
操作方法
1. 相關(guān)材料
? Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell?:AC-1001003）
? 人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化試劑盒（Applied Cell?:AC-1001028）
? 成軟骨檢測(cè)染液（Applied Cell?:AC-1001023）
? Xeno-Free細(xì)胞消化液（Applied Cell?:AC-1001024/1001025）
? 磷酸鹽緩沖液(1×PBS) （Applied Cell?: Cat.AC-1001037）
2. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化培養(yǎng)基的配制：
2.1 在2-8℃解凍人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化添加劑，輕晃搖勻；
2.2 將添加劑加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（添加劑10mL與90mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹底混合）混勻，即為人類間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化培養(yǎng)基。人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存2-3周。
注意：人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化添加劑只能在2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請(qǐng)用培養(yǎng)基潤(rùn)洗添加劑試管1-2次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。
3. 實(shí)驗(yàn)操作
3.1誘導(dǎo)成軟骨球
3.1.1 誘導(dǎo)成軟骨分化實(shí)驗(yàn)之前，用Xeno-Free細(xì)胞消化液消化后計(jì)數(shù)；
3.1.2 分配0.5 mL細(xì)胞懸液（2-3×105個(gè)細(xì)胞）到15mL或50mL離心管中，300×g，離心5min；
3.1.3 吸掉上清，用2-5mL人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化培養(yǎng)基重懸沉淀。
3.1.4 離心后擰松離心管蓋便于氣體交換，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第2天，細(xì)胞團(tuán)應(yīng)在離心管底部呈球形的團(tuán)狀；
注意：離心后不需要吸掉上清液，且不要隨意晃動(dòng)離心管。
3.1.5 自接種時(shí)間開(kāi)始計(jì)算，每天更換人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化培養(yǎng)基；
注意：每次換液時(shí)，輕輕的搖動(dòng)離心管或輕彈離心管底部確保細(xì)胞球沒(méi)有粘附到管壁上。第4-5天即會(huì)看到非常明顯軟骨球。
3.1.6 15-21天，軟骨球停止生長(zhǎng)，收獲軟骨球：吸掉人間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化培養(yǎng)基，用PBS洗1次。
3.2 成軟骨檢測(cè)染液染色
3.2.1 清洗：軟骨球用PBS清洗2次；
3.2.2 固定：加2mL細(xì)胞固定液，固定30min，水洗2次；
3.2.3 染色：成軟骨檢測(cè)染液（Applied Cell:AC-1001023）染色5min；
3.2.4 洗滌：dH2O洗去多余的染料，軟骨球呈深藍(lán)色。
切片染色：
3.2.1、復(fù)水：將誘導(dǎo)分化的軟骨球切片浸泡在100% (vol/vol) 乙醇中2 × 5 min， 95% (vol/vol) 乙醇中 1 × 2min，70% (vol/vol)乙醇中1 × 2 min；
3.2.2、用流動(dòng)的水沖洗30s；
3.2.3、成軟骨染料染色5min；
3.2.4、用dH2O洗去多余的染料；
3.2.5、脫水：浸泡在95% (vol/vol) 乙醇中2×5min，在100% (vol/vol) 乙醇中2×5min;
3.2.6、用二甲苯清洗3 × 2 min；
3.2.7、用中性樹(shù)膠封片，用顯微鏡觀察并拍照。
4.誘導(dǎo)成軟骨效果圖
