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人多能干細胞分化培養(yǎng)基
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell?人多能干細胞（ES/iPS）分化培養(yǎng)基 |
貨 號 | AC-1001002 |
規(guī) 格 | 500mL |
保存條件 | 基礎(chǔ)培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20～-80℃； 混勻后2-8℃，2周內(nèi)使用完畢。 |
使用范圍 | 人多能干細胞誘導分化，擬胚體形成 |
保質(zhì)期 | 12個月 |
產(chǎn)品簡介
人多能干細胞分化培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell?）研發(fā)的一款適用于人多能干細胞誘導分化的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基可用于EB（擬胚體）的形成。擬胚體是人多能干細胞在懸浮培養(yǎng)條件下形成的球狀結(jié)構(gòu)，可用于細胞多能性檢測，形成擬胚體可驗證細胞分化潛能。
產(chǎn)品特性
l 誘導人多能干細胞（ES/iPS）形成擬胚體
產(chǎn)品內(nèi)容
試劑 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 運輸 |
hPSC Differentiation Basal Medium 人多能干細胞分化-基礎(chǔ)培養(yǎng)基
| 500mL | 1 瓶 | 冰袋 |
hPSC Differentiation Supplement 人多能干細胞分化-添加劑
| 10mL | 1 瓶 | 干冰 |
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操作方法
實驗準備
人多能干細胞分化培養(yǎng)基配制：
1.1 在2-8℃解凍人多能干細胞分化添加劑，輕晃搖勻；
1.2 隨后將添加劑加入到人類多能干細胞分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（每10mL添加劑與500mL分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹底混合）混勻即為人多能干細胞分化培養(yǎng)基（AC-1001002）。人多能干細胞分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲存2-3周。
注意：
1. 人多能干細胞分化添加劑只能在2-8℃解凍，可按實際用量對添加劑進行分裝，分裝后立即使用或儲存于-20℃至-80℃保存。
2. 人多能干細胞分化培養(yǎng)基使用前建議在室溫平衡10-20min，不建議在37℃加熱。
實驗操作(以6孔板為例)
2.1 在顯微鏡下觀察人多能干細胞，確認細胞匯合度達到70–80%，準備傳代。
2.2 清洗：拿出培養(yǎng)板,吸掉原有培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿邊緣緩慢加入37℃預(yù)熱PBS緩沖液，輕輕晃動沖洗，然后吸去PBS緩沖液；
2.3 消化：在培養(yǎng)板中加入1.5mL人多能干細胞無酶消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿
底，并置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育2~5 min；
2.4 吹打：吸掉人多能干細胞消化液（AC-1001008）后，立刻加入室溫平衡好的人
多能干細胞分化培養(yǎng)基，用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底，吹打次數(shù)保持在
3~5次，使皿底貼附的干細胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻，制成干細胞懸液；
注意：吹吸皿底細胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在3~5次為宜，盡量避免形成單細胞。如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。
3.5制備擬胚體
3.5.1懸滴培養(yǎng)法制備擬胚體
A. 稀釋：將細胞懸液稀釋，細胞密度約為1-2×105cells/mL；
B. 制備懸滴：將稀釋好的細胞懸液以30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均勻接種在培養(yǎng)皿皿蓋內(nèi)面，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿蓋將其扣回加有PBS的培養(yǎng)皿上（加入PBS防止懸滴蒸發(fā)），放入37℃，5%CO2箱中培養(yǎng)；
C. 3-4天后，非貼壁型培養(yǎng)皿中預(yù)先加入人多能干細胞分化培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿蓋上的懸滴轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中（6cm培養(yǎng)皿加入3-4mL培養(yǎng)基)中，可觀察到明顯的擬胚體結(jié)構(gòu)，輕輕晃動培養(yǎng)皿使擬胚體均勻分布在培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。
3.5.2懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體
A. 稀釋：將細胞懸液稀釋，細胞密度約為2-5×105cells/mL；
B. 接種：將稀釋好的細胞懸液接種至非貼壁型培養(yǎng)皿內(nèi)。
3.6換液
A. 換液頻率：使用懸滴法制備擬胚體,將懸滴接入非貼壁型培養(yǎng)皿繼續(xù)培養(yǎng)后，每2-3天換一次液；使用懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體，大約在第3天形成明顯的擬胚體結(jié)構(gòu)，可進行初次換液，后續(xù)每2-3天換一次液;
B. 換液方法：將需換液的擬胚體懸液轉(zhuǎn)移至15mL/50mL離心管中，靜置約3min,待擬胚體沉降至管底，吸掉上清，加入室溫平衡好的人多能干細胞分化培養(yǎng)基，用巴士滴管輕輕轉(zhuǎn)移至非貼壁型培養(yǎng)皿中，輕輕晃動培養(yǎng)皿使之均勻分布在培養(yǎng)皿中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
擬胚體形態(tài)圖
擬胚體形態(tài)圖
質(zhì)量控制
檢驗項目 Test Catagories | 參考數(shù)據(jù) Reference Data | 結(jié)果 The results |
外觀 Physical APPearance | 橙紅色液體 Orange-red liquid | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
澄清度 Clarity | 澄清 Clear | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
pH值 Ph value | 6.9-7.3 | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
滲透壓 Osmolality | 270-340 （mosm/KgH2O） | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
無菌 Sterility | 無菌 Sterility | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
支原體 Mycoplasma | 0.11um過濾，支原體試驗為陰性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |
細胞生長試驗 Cell growth test | 細胞呈克隆狀，克隆邊緣光滑 The cells are clonal, with smooth edges | 符合規(guī)定 Conform to the provisions |