北京信科奧達(dá)科技有限公司測序項目

簡稱“信科奧達(dá)”，主營生物技術(shù)服務(wù)及其配套試劑、耗材、儀器的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售，秉承“專業(yè)、求實、開拓、創(chuàng)優(yōu)”的服務(wù)理念，為客戶提供專業(yè)化的技術(shù)服務(wù)及解決方案。 

測序項目總項目：

1、常規(guī)sanger測序:                             
EST測序
菌液測序
PCR產(chǎn)物測序說
T載體克隆測序
外顯子測序                             

2、基因序列分析：
普通/熒光定量引物設(shè)計與合成
測序/飛行質(zhì)譜/熒光定量法SNP多態(tài)性檢測分析
STR/SSR檢測分析，全基因合成
多肽合成
載體構(gòu)建與表達(dá) 

3、核酸提?。?nbsp;
植物、動物、全血、細(xì)菌等各種組織DNA/RNA提取             

測序具體內(nèi)容：   

                   熒光定量技術(shù)服務(wù)
 

一、   項目簡介
1、TaqMan探針方法
2、SYBR Green I嵌合熒光法
3、在聚合延伸過程中，引物退火并形成PCR產(chǎn)物。
4、聚合完成后，SYBR Green染料與雙鏈產(chǎn)物結(jié)合，定量PCR系統(tǒng)檢測到熒光的凈增量加大。 

二、  服務(wù)項目：定性分析，絕對定量，相對定量（mRNA表達(dá)量分析）

三、  服務(wù)流程
1、客戶以電話或郵件形式告知公司要進(jìn)行的實驗基因名稱和標(biāo)本數(shù)目；
2、公司派專業(yè)技術(shù)人員與您洽談實驗費用和熒光定量探針設(shè)計方案（序列和設(shè)計有公司負(fù)責(zé)）；
3、簽訂實驗技術(shù)服務(wù)合同，交費用的50%作為訂金（若實驗沒有結(jié)果或結(jié)果未達(dá)到客戶要求，訂金不退）；
4、公司合成熒光定量探針、派相關(guān)人員取回實驗標(biāo)本；
5、進(jìn)行RNA抽提、鑒定、cDNA合成實驗；
6、進(jìn)行實時熒光定量PCR實驗（每個標(biāo)本的每個基因均進(jìn)行3倍平行孔實驗，保證獲得準(zhǔn)確、無誤差、客觀的樣品基因擴增數(shù)據(jù)）；
7、通過統(tǒng)計分析軟件計算目的基因的mRNA表達(dá)數(shù)據(jù)；
8、提供完整的實驗報告（實時熒光擴增曲線圖、分析數(shù)據(jù)、實驗步驟、試劑儀器）；
9、客戶交齊全額費用。

四、  服務(wù)要求
1、請認(rèn)真填寫Real Time PCR檢側(cè)技術(shù)服務(wù)委托單；
2、請您提供新鮮的且盡量多的材料（各種材料的 RNA 提取量請參照“總 RNA 的提取”），或直接提供純化好的總RNA（大于5μg/樣品）；（各種材料的 DNA 提取量請參照“ D NA 的提取”），或直接提供純化好的DNA（大于5μg/樣品) ；
3、如果提供的材料為細(xì)胞或組織，應(yīng)保證材料新鮮：
細(xì)胞樣品：細(xì)胞培養(yǎng)至少達(dá)105以上，培養(yǎng)后細(xì)胞請勿做任何處理。
組織樣品：離體后30分鐘內(nèi)入液氮保存，動物組織為5mg以上。
血液樣品：分離白細(xì)胞后，-70℃保存。
4、請通過 E-mail 提供已知的全長基因序列；
5、請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料： DNA/ RNA 來源、豐度等。

五、  配套服務(wù)項目：引物（探針）設(shè)計和篩選，基因組DNA提取組織，基因組RNA提取，質(zhì)粒構(gòu)建，RT-PCR反應(yīng)

　　　　　　　　　雙熒光素酶報告基因檢測服務(wù)

　雙熒光素酶報告基因法（luciferase Assay）檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)DNA相互作用。

　轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)分子，也稱為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動子中的特異順序結(jié)合，這些特異性的序列被稱為順式因子，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實現(xiàn)共價結(jié)合，從而對基因的表達(dá)起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因?qū)嶒灒╨uciferase Assay）是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動子中的特異順序結(jié)合的重要手段，其原理簡述如下：
       （1）  構(gòu)建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達(dá)序列前方的報告基因質(zhì)粒，如pGL3-basic等。

（2）   將要檢測的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞或其它相關(guān)的細(xì)胞系。如果此轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動子，則熒光素酶基因就會表達(dá)，熒光素酶的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強度成正比。

（3）  加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應(yīng)，產(chǎn)生熒光素，通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性，從而判斷轉(zhuǎn)錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用。 
 

實驗步驟：
       （1）  用生物信息學(xué)方法分析并預(yù)測啟動子區(qū)可能的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。

（2）  設(shè)計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質(zhì)粒（pGL3-basic）中。

（3）  篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質(zhì)粒備用。

（4）  擴增轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，提純備用。同時準(zhǔn)備相應(yīng)的空載質(zhì)粒對照，提純備用。

（5）  培養(yǎng)293（或其它目的細(xì)胞），并接種于24孔板中，生長10-24小時（80%匯合度）。

（6）  將報告基因質(zhì)粒與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

（7）  提取蛋白并用于熒光素酶檢測。

（8）  加入底物，測定熒光素酶的活性。

（9）  計算相對熒光強度，并與空載對照比較。
 收費情況請電詢
 

                      
                      
　　　　　　　　　　質(zhì)譜鑒定技術(shù)服務(wù) 
 
1、 簡介
基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜MALDI-TOF-MS可測定生物大分
 
　分子量高達(dá)600KDa。通過肽質(zhì)量指紋譜（PMF）和肽序列標(biāo)簽（PST）技術(shù)可高靈敏度、高通量、快速鑒定蛋白質(zhì)，是蛋白質(zhì)組學(xué)研究必不可少的生物質(zhì)譜，也是臨床蛋白質(zhì)組學(xué)首選的技術(shù)。還可分析寡核苷酸序列、多糖結(jié)構(gòu)、聚合物分子量分布、特殊合成化學(xué)品等。公司擁有Bruker Ultraflex MALDI/TOF-TOF質(zhì)譜，為廣大客戶提供質(zhì)譜鑒定相關(guān)技術(shù)服務(wù)。
　
2、 收費標(biāo)準(zhǔn)

項目                                               參考價格                                   說明
    膠內(nèi)酶切                                           150元
肽質(zhì)量指紋圖分析                                 450元/樣品                                考染
多肽和蛋白質(zhì)分子量測定                      180元/樣品
串聯(lián)質(zhì)譜測序                                        600元/肽段
多肽和蛋白質(zhì)的純度測定                      350元/樣品
數(shù)據(jù)庫查詢與結(jié)果分析                          200元/個數(shù)據(jù)

3、 培訓(xùn)及送樣須知

送樣品可為凍干粉、溶液或膠內(nèi)蛋白質(zhì)（最好為考染），凍干粉、溶液應(yīng)無鹽。樣品如有毒性或腐蝕性或需特殊保存的樣品，請事先說明。