摘要:分子生物技術越來越發(fā)達的今天,隨著各種DNA提取方法的橫空出世,廣大學者眾說紛紜。DNA的提取過程猶如白居易的詩句一樣“千呼萬喚始出來,猶抱琵琶半遮面”。如何選擇合適的DNA提取方法,解開DNA的神秘面紗,成了人們重點關注的對象。
目前,“高質量、高產(chǎn)量、高效率、高通量”的快速DNA提取,已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物學的主流,是廣大實驗研究學者注重的方向。下面我們來一一揭開現(xiàn)階段各種DNA提取方法的面紗。
①堿裂解法DNA提?。捍朔椒ɑ贒NA的變性與復性差異而達到分離的目的。
②煮沸法DNA提?。褐蠓袝r將樣品中的DNA通過核酸裂解液的作用釋放出來,離心沉淀后將雜質去除,上清液即可用作PCR擴增。
③濃鹽法DNA提?。豪肦NA和DNA在電解溶液中溶解度不同,將二者分離。
④苯酚抽提法DNA提?。豪肈NA與蛋白質的溶解特性將兩種物質分別溶于水和苯酚中,從而將二者分離。
⑤水抽提法DNA提?。豪煤怂崛苡谒牡男再|,用低鹽溶液除去RNA,將沉淀溶于水,使DNA充分溶于水中。此法提取的DNA中含有較多的蛋白質,可以在此法的基礎上,在提取過程中加入SDS。
⑥離心柱法DNA提?。翰捎锰厥夤杌|材料在一定的高鹽緩沖系統(tǒng)下高效、專一地吸附DNA、RNA。
⑦磁珠法DNA提?。捍朔ㄖ械募毎呀庖嚎梢允辜毎呀猓⑹笵NA結合的蛋白質變性,DNA游離釋放,磁珠可以特異性地吸附DNA,通過洗滌,去除DNA以外的RNA、蛋白質等雜質,再因洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA,得到純度和濃度均等很高的DNA,可直接用于PCR模板、基因工程等。
通過以上各種方法的介紹,以及根據(jù)我個人近些年運用上述方法得出的結果,個人總結出了下面的“封神榜”,僅供大家參考:
方法 | 排行 | 封神人物 | 耗時 | 苯酚或氯仿 | 雜質 | OD260/OD230 | OD260/OD280 |
磁珠法 | 鴻鈞道人 | 很短 | 無 | 很少 | 1.7-2.0 | 2.0以上 |
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離心柱法 | 通天教主 | 較短 | 無 | 較少 | 1.6-1.8 | 1.0以上 |
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苯酚抽提法 | 老子 | 短 | 有 | 少 | 1.7左右 | 1.0以上 | |
堿裂解法 | 接引道人 | 較長 | 無 | 多 | 1.7左右 | 2.0以上 | |
濃鹽法 | 元始天尊 | 長 | 有 | 多 | 1.5左右 | 1.2左右 | |
水抽提法 | 準提道人 | 短 | 無 | 多 | 1.5左右 | 1.2左右 | |
煮沸法 | 多寶道人 | 較長 | 無 | 多 | 1.5左右 | 1.2左右 |
根據(jù)以上的對比,我個人比較傾向于磁珠法提取DNA,我向大家推薦河南惠爾納米科技有限公司(http://www.huierbio.com)的磁珠法DNA提取試劑盒,據(jù)我了解,他們公司的試劑盒完全自主研發(fā)與生產(chǎn),對于使用者能給與很大的指導與幫助,并具備七大優(yōu)點:無毒無害、操作簡便、效果穩(wěn)定、價格便宜、產(chǎn)量高、純度高、通量高。