一、色譜柱的構(gòu)造：
柱管、壓帽/卡套、篩板（濾片）、接頭
分析型
常規(guī)分析柱（4.0/3.9mm、4.6mm）
窄徑柱（1.0mm、2.1mm）
毛細(xì)管柱（0.2-0.5mm）
制備型
半制備柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm）
制備柱（21.2mm、30mm、50mm）
保護(hù)柱
保護(hù)柱套
保護(hù)柱芯
二、色譜柱填料基質(zhì)：
1. 硅膠基質(zhì)- pH 2-8 ------------------ 高或低pH下, 硅膠會(huì)溶解
2. Al2O3 . nH2O - pH1-14-----------化學(xué)修飾困難
3. 聚合物基質(zhì) - pH1-14-------------孔結(jié)構(gòu)復(fù)雜, 孔徑不均勻?qū)е轮Р粔蚋? 有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物基質(zhì)溶漲而受損
三、C18色譜柱---性能影響因素
A:物理因素1.硅膠純度 ----• 填料硅膠的純度與殘留金屬離子濃度
2.色譜柱尺寸---• 填料床的長(zhǎng)度和內(nèi)徑
3.顆粒形狀------• 球型或不規(guī)則型
4. 粒徑------------• 平均顆粒直徑, 通常3-10µm
5.表面積---------• 顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和, 以m2/gram表示
6.孔徑------------• 顆粒的孔或腔的平均尺寸, 范圍80-300Å
B：化學(xué)性質(zhì)
1.鍵合類型----- • 單體鍵合 - 鍵合相分子與基體單點(diǎn)相連
2.碳覆蓋率------• 與基體物質(zhì)相連的鍵合相的量
3.封端------------• 鍵合步驟之后, 用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來(lái)
四、如何推薦色譜柱
在選擇色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等，
1.樣品是極性的且弱酸性的；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè)，即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強(qiáng)，或酸性太強(qiáng)；可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)，另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái)，基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn)）
3. 若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱（如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等），他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng)，或堿性太強(qiáng)；可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)（優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是目前實(shí) 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少，價(jià)格也高）或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法）選擇強(qiáng)離子交換柱（缺點(diǎn) 是不能用來(lái)分析其它樣品，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)）也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱