免疫熒光三標？——藍色熒光的AMCA與Dylight 405標記二抗
 

做免疫熒光實驗中，經(jīng)常要進行免疫熒光的雙標記實驗，也就是在同一個樣本上同時進行兩種蛋白的免疫熒光檢測。具體的實驗時，可以選擇不同來源的一抗，然后再選擇分別針對一抗的二抗，同時二抗上標記有不同的熒光團。一般的雙標記實驗里，都會選擇一個綠色的（如FITC、Cy2、Dylight 488等）熒光標記，一個紅色的（如Rhodamin、Cy3、TRITC、Texas Rad、Dylight 539等）的熒光標記。紅綠二色的區(qū)分度很大，效果也比較理想。那么，如果是三標呢？請看看下面的一個圖。


 

   左側的一個免疫熒光圖片就包括了3種顏色，綠色FITC（FITC最大吸收光波長為490495nm，最大發(fā)射光波長520530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光）和紅色羅丹明Rhodamin（最大吸收光波長為570nm，最大發(fā)射光波長為595～600nm，呈橘紅色熒光）的熒光均為熒光團標記的二抗，而第三種顏色則來自于負染細胞核的藍色DAPI染料（DAPI 的激發(fā)光波長為358 nm ,發(fā)射光波長為461 nm ,熒光激發(fā)下發(fā)藍光，與細胞核DNA結合）。一般來說，綠色和紅色熒光重合后顯示的是黃色，而橙色、黃色、紅色的光非常接近，因此三標的時候，一般選擇藍色熒光。就如左圖所示。

 

   實際上，上面的示例并不是完全意義上的免疫熒光三標，因為DAPI只相當于負染。還有一種情況，需要同時在一個樣本里通過免疫熒光技術對三種蛋白進行定位，這就需要選擇第三種熒光團，而不是DAPI這樣的染料。也即，一個綠色熒光標記的二抗、一個紅色熒光標記的二抗，再加一個藍色熒光標記的二抗。艾美捷為您提供兩種藍色熒光標記的抗體產(chǎn)品，一種是AMCA藍色熒光，還有一種是具有更高熒光強度、更好光學穩(wěn)定性和敏感度的Dylight 405藍色熒光。

 

右圖所示即為AMCA藍色熒光與FITC、Cy3等熒光的對比圖例。AMCA藍色熒光團的吸收光波長最大為350nm，發(fā)射熒光則為450nm。對于熒光顯微鏡來說，AMCA可以用汞燈來激發(fā)，用紫外濾板來觀察。由于AMCA的信號相對較弱，單標實驗中不推薦使用AMCA。AMCA和熒光素的熒光波長只有很小的重疊范圍，而和發(fā)出長波長熒光的熒光基團沒有或者只有極少的重疊，因此它最常用于多標記實驗中，比如免疫熒光顯微鏡和流式細胞儀。由于人眼不能很好的檢測藍色熒光，在多標記的實驗中，AMCA耦聯(lián)的二抗應當被用于檢測大量的抗原。艾美捷提供EarthOx 多種藍色AMCA熒光標記的二抗，部分產(chǎn)品如下：

同時，Dylight 405作為Dylight系列的熒光團，具有很多優(yōu)勢，包括更高的熒光強度、更好的光學穩(wěn)定性和特異性、更高的性價比等。具體見熒光二抗的選擇——Dylight熒光與傳統(tǒng)熒光標記的比較。EarthOx的部分Dylight 405熒光抗體產(chǎn)品如下：

作為多家國際知名品牌的中國或區(qū)域代理，艾美捷能為您提供全系列的Dylight原裝進口熒光二抗，包括Jackson、KPL的大包裝粉末形式的 Dylight熒光二抗，另外，也提供EarthOx的小包裝液體形式Dylight熒光二抗，均具有很高的性價比。針對熒光標記二抗，有FITC、 TRITC、Rhodamine、PE、Cy3/5、AMCA、Dylight等多種熒光標記二抗；按照檢測物種分，有抗 人、大鼠、小鼠、豬、驢、綿羊、山羊、小雞、馬、兔、倉鼠、狗、牛，以及多種細菌類二抗；另外，還有IgG、IgA、IgM以及IgG（Fc）、 IgG（ab’）2等不同類型抗體。如果您對上述產(chǎn)品感興趣，請致電027-84454412，或13317111952到艾美捷科技有限公司垂詢相關的產(chǎn)品信息及完整實驗解決方案。