GAPDH抗體大全——總有一款合適的GAPDH抗體

在Western Bloting實驗中，可能存在總蛋白濃度測定不準確，或者蛋白質(zhì)樣品在電泳前上樣時產(chǎn)生的樣品間的操作誤差；這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參，比如內(nèi)參GAPDH的含量來進行校正。當然除了GAPDH抗體，β-Actin抗體、β-Tubulin抗體等也是最常見的內(nèi)參抗體。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶，由4個30-40kDa的亞基組成，分子量146kDa，檢測條帶大約在36kDa。GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達，廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標準化的內(nèi)參。



選擇合適的GAPDH抗體顯得尤為重要，首先GAPDH的WB檢測條帶大約為36kDa，因此對于一些待檢測分子量大于40kDa或者小于30kDa的目的蛋白尤為合適。一般來說，國產(chǎn)的抗體在質(zhì)量穩(wěn)定性、效價等方面存在不足，但是進口品牌如Abcam、Millipore、CST等價格偏高，一般在￥3000/100ul左右。下面我們?yōu)槟扑]三款GAPDH原裝進口抗體，分別是美國EarthOx和ProteinTech的產(chǎn)品。EarthOx的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody（貨號E021010）是小鼠源的單抗，其效價很高，廠商推薦的WB起始稀釋比率為1:1000，實際應(yīng)用過程中，有使用1:10000或更高的報告，遠遠高于此稀釋比率，說明其免疫效價很高，另外，其檢測種屬也很多，包括人、牛、豬、小鼠、大鼠等。右圖為EarthOx的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody（貨號E021010）在不同細胞系內(nèi)WB的檢測結(jié)果。

 

                                       

ProteinTech的GAPDH Polyclonal Antibody（貨號10494-1-AP）則是一款兔源多克隆GAPDH抗體，對于需要兔源GAPDH抗體的客戶則是一個不錯的選擇。同樣，ProteinTech的GAPDH Monoclonal Antibody（貨號60004-1-Ig）則是另一款單克隆抗體，除了WB和IF外，還可以應(yīng)用于免疫組化IHC等實驗。需要注意的是IF也是GAPDH抗體常用的應(yīng)用類型之一。左圖為ProteinTech的GAPDH Monoclonal Antibody（貨號60004-1-Ig）抗體在石蠟包埋、福爾馬林固定的切片上的應(yīng)用。

 

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