高速逆流色譜儀是一種新的液相色譜技術(shù),利用液液兩相的逆流分配,在沒有固體填料、不需使用固態(tài)固定相的情況下,而是利用離心力產(chǎn)生的恒定力將固定相保留在由管道連接的一系列的腔體中,實現(xiàn)復雜化學物質(zhì)的混合物分離。它以液體溶劑為固定相,螺旋柱在行星運動時產(chǎn)生的離心力,使互不相溶的兩相不斷互相混合,同時保留其中的一相,使用恒流泵連續(xù)輸入另一相,樣品溶質(zhì)在兩相之間反復分配,按分配系數(shù)的次序,被依次洗脫出來,它替代了傳統(tǒng)制備型高效液相色譜的填充柱。當你計劃購買一臺高速逆流色譜儀的時候,哪些指標是衡量其性能的關(guān)鍵指標呢?
1. 固定相保留率
由于高速逆流色譜儀的固定相是液體,在分離過程中如何將液體固定相一直保留在里面,是所有生產(chǎn)廠家和使用者最關(guān)心的問題,它是由儀器的本身性能決定的,它與公轉(zhuǎn)半徑、自轉(zhuǎn)半徑、旋轉(zhuǎn)速度等因素有關(guān),也與流動相的流速有關(guān)聯(lián),與溶劑體系關(guān)系不大;最好設(shè)備的固定相保留率可以達到90%;一般設(shè)備的固定相保留率為50%。
如柱體積為200ml,流動相流速為2ml/min,固定相保留率為90%,表示流動相和全部180ml固定相交換一次的時間是10分鐘;如固定相保留率為50%,表示流動相和全部100ml固定相交換一次的時間需要50分鐘;線圈中180ml固定相和100ml固定相的理論塔板數(shù)也是相差比較大的;從中可以看到二者的分離效率和分離效果相差很大。
如果設(shè)備的固定相保留率較低,則對兩相溶劑體系的選擇和配比要求就高,使用者就需要不斷調(diào)整溶劑配比,進行多次實驗摸索,找到最佳的配方,以提高樣品的分離度,才能將樣品中的多個成分分離出來;如果設(shè)備的固定相保留率很高,對兩相溶劑體系的選擇和配比要求就十分寬松,稍微調(diào)整就能將樣品中的多個成分分離出來,更為重要的是有些樣品只有在高的固定相保留率下才能分開,固定相保留率低就無能為力了。各個生產(chǎn)廠家的設(shè)備指標都不標注固定相保留率是多少,但都可以提供以前的分析測試報告或者出廠的測試報告供用戶參考的。
2. 線圈的數(shù)量和柱體積
以前受到技術(shù)的限制,一臺儀器只能放置一個線圈,且把線圈分成多個部分繞制在幾個自轉(zhuǎn)軸上面,為了保持動態(tài)平衡,公轉(zhuǎn)半徑、自轉(zhuǎn)半徑都很小,固定相保留率也只能達到50%左右;最近幾年動態(tài)平衡技術(shù)大幅提高,首先實現(xiàn)了每個線圈可以獨立繞制就能平衡,其次完成了多個線圈混合繞制,最終實現(xiàn)了一臺儀器上可以放置多個線圈的夢想,經(jīng)常配置兩個線圈或四個線圈。
柱體積是由線圈的直徑和長度決定的,其大小影響到上樣量的多少,合理的配置柱體積可以覆蓋大部分樣品的制備,一般習慣配置一個25ml的分析線圈,用于樣品成分的簡單分析和前期實驗的摸索;同時配置一個100ml的制備線圈,一次最大上樣量可以達到2克;如果條件允許,配置4個不同柱體積的線圈,使用起來將更方便,能實現(xiàn)線圈之間的串并聯(lián),從而提高樣品的分離效果和分離能力。
3. 線圈的材質(zhì)
高速逆流色譜儀的線圈材質(zhì)一般使用PTFE材料,它耐酸耐堿,同時適合所有的有機溶劑,材質(zhì)價格也便宜,重量較輕,很容易實現(xiàn)動態(tài)平衡,但唯一缺點是耐壓較低,在高速旋轉(zhuǎn)的情況下,工作壓力超過10bar或者線圈出口堵塞,PTFE線圈就有可能爆裂,產(chǎn)生溶劑泄漏;一旦發(fā)生內(nèi)部線圈爆裂,對設(shè)備將是毀滅性的,修復的成本是十分昂貴的;采用316不銹鋼制作線圈,是近幾年動態(tài)平衡技術(shù)大幅提高以后才出現(xiàn)的,徹底解決了高速逆流色譜儀耐壓低的缺陷,工作壓力可以承受1000bar,由于316不銹鋼材質(zhì)較重,成本高,線圈繞制難度大,動態(tài)平衡技術(shù)要求高,從而導致儀器整體價格偏高;鈦合金是近幾年出現(xiàn)的一種新型材料,它克服了316不銹鋼材質(zhì)較重的缺點,對動態(tài)平衡技術(shù)要求不高,但鈦合金材質(zhì)的價格比316不銹鋼要貴出很多,是三種材質(zhì)中的儀器價格最貴的。
此外設(shè)備的各個安全保護功能,進樣六通閥,以及不同體積的樣品定量環(huán)是高速逆流色譜儀必須配置的,方便今后使用。
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